Aislamiento de RNA de oviducto de cerdo para la construcción de una biblioteca de cDNA

VERÓNICA ARAOZ, MARTÍN ARGAÑARAZ, PABLO VALDECANTOS, MARIELA ROLDÁN Y DORA MICELI.

San Miguel de Tucuman, Tucuman, Argentina

Jornada; 1º Jornadas Científicas y Encuentro de Jóvenes Investigadores “Augusto Palavecino"; 2000

Fac. de Bioq., Qca. y Fcia de la UNT

AISLAMIENTO DE RNA DE OVIDUCTO DE CERDO PARA LA CONSTRUCCION DE UNA BIBLIOTECA DE cDNA   Verónica Araoz, Martin Argañaraz, Pablo Valdecantos, Mariela Roldán y Dora Miceli.   El oviducto de los mamíferos provee el ambiente bioquímico esencial para el transporte de los gametos, la capacitación espermática, la fertilización y los primeros estadíos de la embriogénesis. Las secreciones del oviducto contienen proteínas representativas del transudado plasmático y otras macromoléculas sintetizadas y secretadas por el epitelio oviducal. En nuestro laboratorio se estudia la actividad de enzimas proteolíticas que estarían involucradas en el proceso reproductor, encontrándose alta actividad de las mismas en el fluido oviducal de diestro. Debido a que se desea conocer si estas enzimas son sintetizadas por el oviducto, el objetivo de este trabajo es la obtención de RNA de oviducto de cerdo en diestro para la obtención de una biblioteca de cDNA. Los oviductos se obtuvieron de animales de frigorífico, clasificándolos en los distintos estadios del ciclo estral de acuerdo a la metodología implementada por nuestro laboratorio a dichos efectos. La extracción de RNA se efectuó con isotiocianato de guanidina- fenol- cloroformo. La calidad de la muestra obtenida se evaluó en geles de agarosa y también analizando la relación DO 260 nm/ DO 280 nm. La corrida electroforética reveló dos bandas correspondientes a los RNA ribosómicos de 18 S y 28 S, siendo esta última de mayor intensidad. Las lecturas de DO a 260 y 280 nm mostraron escasa contaminación proteica. De los resultados obtenidos se concluye que el RNA total aislado presenta un alto grado de pureza e integridad, lo que permitiría llevar a cabo los subsiguientes pasos para la construcción de la biblioteca de cDNA de oviducto de cerdo.