Diferenciación de las 2 razas del Sunflower chlorotic mottle virus mediante RT-PCR/RFLP

BEJERMAN, NICOLÁS.; GIOLITTI, FABIÁN; LENARDON, SERGIO

Córdoba, Argentina

Congreso; I Congreso Argentino de Fitopatología; 2008

Asociación Argentina de Fitopatólogos

El Sunflower chlorotic mottle virus (SuCMoV) es el virus mas ampliamente distribuido en el cultivo de girasol en Argentina. Existen 2 razas, la común (C) que induce moteado clorótico y la anillos (AC) que induce anillos cloróticos. Ambas razas no pueden ser diferenciadas mediante técnicas serológicas. A nivel de cápside proteica (CP) ambas razas tienen una similitud del 87,3% y del 94,8%, para nucleótidos y aminoácidos respectivamente. El objetivo del presente trabajo fue desarrollar una ténica que permita diferenciar las dos razas de este virus. La secuenca nucleotídica de la CP de ambas razas fue analizada utilizando el software DNAMAN en búsqueda de enzimas de restricción que la corten en sitios diferenciales. Así se seleccionó la enzima PvuII que no reconoce sitios de corte en la secuencia de la CP de la raza AC y reconoce solo un sitio de corte en la CP de la raza C y la enzima EcoRV que no reconoce sitios de corte en la CP de la raza C y reconoce solo un sitio de corte en la CP de la raza AC. Reacciones de RT-PC con iniciadores específicos para la CP del virus, amplificaron fragmentos de tamaño esperado (807pb), que al ser digeridos con la enzima PvuII, mostraron en geles de agarosa, una única banda (807pb) para la raza AC y dos para la raza C (673pb y 134pb), mientras que fragmentos digeridos con la enzima EcoRV mostraron una unica anda (807pb) para la raza C y dos para la raza AC (564pb y 243pb). La técnica de RT-PCR/RFLP permite diferenciar rápida y eficientemente las dos razas del SuCMoV.