Diagnóstico y caracterización molecular de Peanut mottle virus en el cultivo de maní

DE BREUIL SOLEDAD; GIOLITTI, FABIÁN; BEJERMAN, NICOLÁS.; LENARDON, SERGIO

Congreso; 2do Congreso Argentino de Fitopatología; 2011

Peanut mottle virus (PeMoV) fue identificado por microscopía electrónica y serología como el agente causal del moteado del maní. Esta virosis es la más prevalente en el cultivo y está presente en las principales regiones maniseras del país. El objetivo de este trabajo fue desarrollar una técnica molecular para diagnosticar la virosis y caracterizar parcialmente un aislamiento de PeMoV. Se realizaron extracciones de RNA total a partir de plantas infectadas y sanas con tampón CTAB 2%, que se utilizó como templado en pruebas de RT-PCR donde se probaron diferentes condiciones de ciclado y un juego de cebadores específicos diseñados para el gen de la cápside proteica (CP) del virus: CP-PeMoV(Fw): 5´ACAATGATGAAGTTCGTTACC3´ y CP-PeMoV(Rv): 5´GCCAACACACGATAAACATAA3´. Los parámetros de ciclado seleccionados fueron: 48 ºC por 1 h, 94 ºC por 4 min (40 ciclos de 94 ºC por 30 s, 50 ºC por 1 min, 68 ºC por 2 min) y una extensión final de 68 ºC por 7 min. Los productos de PCR fueron visualizados en gel de agarosa y se corroboró la presencia de una banda de ~ 980 pb, sólo en las plantas infectadas. El cDNA fue clonado y secuenciado; la secuencia presentó un alto porcentaje de identidad con otros aislamientos de PeMoV tanto a nivel de nucleótidos (94.3% a 97.5%) como de aminoácidos (96.4% a 98.6%). La secuenciación del gen de la CP confirma la identidad del agente causal del moteado del maní. Además, se dispone de una técnica de diagnóstico molecular para la identificación del PeMoV.