La heparina como aceptor de protaminas en la descondensación nuclear del espermatozoide humano

ROMANATO, MARINA; VITALE, ARTURO; REGUEIRA, ELEONORA; CAMEO, MÓNICA; CALVO, LUCRECIA; CALVO, JUAN CARLOS

Hotel 13 de Julio, Mar del Plata, Buenos Aires, Argentina

Congreso; Congreso Conjunto de Sociedades Biomédicas; 2004

1063. (7806) LA HEPARINA COMO ACEPTOR DE PROTAMINAS EN LA DESCONDENSACION NUCLEAR DEL ESPERMATOZOIDE HUMANO. ROMANATO, MARINA  (1); VITALE, ARTURO (2); REGUEIRA, ELEONORA (1); CAMEO, MÓNICA (4); CALVO, LUCRECIA (1); CALVO, JUAN CARLOS (1,3) (1) IBYME, (2) PROPLAME, Dpto. Qca. Orgánica, (3)Dpto. Qca. Biológica FCEyN UBA, (4)Biología de la Reproducción(1) IBYME, (2) PROPLAME, Dpto. Qca. Orgánica, (3)Dpto. Qca. Biológica FCEyN UBA, (4)Biología de la Reproducción Los espermatozoides humanos se descondensan in vitro en presencia de heparina (Hep) y glutatión (GSH). In vivo, dentro del ovocito, el espermatozoide tiene su núcleo expuesto. Estudios previos de nuestro laboratorio indican que in vitro la Hep descondensa núcleos aislados, que su actividad descondensante está relacionada con su sulfatación y que el heparán sulfato (HS), análogo estructural de la Hep, podría ser el agente descondensante in vivo. Los objetivos de este trabajo fueron: 1) estudiar la importancia de los grupos sulfato para la actividad de Hep / HS y 2) comprobar que la Hep es capaz de desplazar a las protaminas de su asociación al ADN. 1) El análisis molecular por computadora de 4 unidades disacarídicas, para heparinas nativas, modificadas (desulfatadas, acetiladas y la combinación de ambos cambios) y heparán sulfato, demostró que los grupos sulfato son imprescindibles para la actividad, que cuanto más expuestos están y menos impedidos se encuentren, como en el caso de Hep nativa y HS, más activos son, así como también cuanto más en línea se hallen. 2) Se utilizaron muestras de donantes normospérmicos (OMS). Se aislaron los núcleos (SDS, sonicado y colchón de sacarosa) y se descondensaron (GSH 10 mM y Hep 46 ?M, 30´ a 37? C; controles: Hep o GSH sólo). Se extrajeron las proteínas básicas nucleares mediante extracciones sucesivas con: 1) NaCl–Urea–mercaptoetanol, 2) HCl, 3)TCA. Las proteínas extraídas de núcleos descondensados y controles se analizaron mediante geles ácidos de poliacrilamida. Se observó una marcada disminución en las bandas de protaminas P1 y P2 en las extracciones de núcleos descondensados con respecto al control. Concluimos que la Hep in vitro puede desplazar las protaminas de su asociación con el ADN, que la sulfatación de la molécula es fundamental para este proceso y proponemos que el HS, análogo estructural de la Hep, haría lo mismo in vivo.