Primeros indicios de la presencia de heparán sulfato, posible agente descondensante del espermatozoide humano in vivo, en el ovocito

MARINA ROMANATO, ELEONORA REGUEIRA, MARIANA ZAPPI, CECILIA DE DIOS, LUCRECIA CALVO Y JUAN CARLOS CALVO

Mar del Plata, Argentina

Congreso; LI Congreso de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica (SAIC); 2006

138. (203) PRIMEROS INDICIOS DE LA PRESENCIA DEHEPARAN SULFATO, POSIBLE AGENTE DESCONDENSANTE DEL ESPERMATOZOIDE HUMANO IN VIVO,EN EL OVOCITO. ROMANATO MARINA (1), REGUEIRA ELEONORA (1), ZAPPI MARIANA (1), DE DIOS CECILIA(1), CALVO LUCRECIA (1), CALVO JUAN CARLOS (1,2) (1) IByME (2) FCEYN ROMANATO MARINA (1), REGUEIRA ELEONORA (1), ZAPPI MARIANA (1), DE DIOS CECILIA(1), CALVO LUCRECIA (1), CALVO JUAN CARLOS (1,2) (1) IByME (2) FCEYN Los espermatozoides humanos se descondensan in vitro conheparina (Hep) y glutatión (GSH). Estudios previos de nuestro laboratorio indican que in vitro, el heparán sulfato (HS), análogoestructural de Hep, pero no así otros glicosaminoglicanos (GAGs) presenta actividad descondensante similar a Hep y hemos propuestoque HS actuaría in vivo como aceptor de protaminas. El objetivo de este trabajo fue investigar mediante 2 estrategias distintasla presencia de HS en el ovocito. Se utilizaron muestras dedonantes normospérmicos (OMS) y ovocitos frescos de ratonas CF1 de 8 semanas estimuladas hormonalmente con PMSG (5 UI) y hCG (5 UI). Se recuperaron los ovocitos del oviducto y se eliminaron células del cúmulus (hialuronidasa 0,1% en PBS) y zona pelúcida (Tyrodes ácido, pH 2,5). 1) Ovocitos fijados con metanol se marcaron con Rubipy (Cloruro de Tris (2,2´-bipiridina) Rutenio (II)) 0,1 y 1 mg/ml en agua destilada a pH 1,5 (marcación especifica de grupos sulfato). 2) Se descondensaron espermatozoides in vitro entre porta y cubreobjetos en presencia de Hep 46 uM + GSH 10 mM u ovocitos rotos por presión mecánica con cubreobjetos+ GSH 10 mM, durante 3,5 h. Como control, se descondensaron espermatozoides en tubo en las condicioneshabituales (Hep/GSH). 1) El análisis por microscopia confocal revelo localización citoplasmática de HS en el 100% de los ovocitos observados. 2) No se encontraron diferencias significativas entre la descondensación de espermatozoides en presencia deovocitos (38±8%) vs. Hep + GSH (41±6%) (n=7, Paired Student, p=0.25). Resultados preliminares indican que el agregado de condroitinasa ABC (100 mU/ml) a los ovocitos, que hidroliza condroitín sulfato A, B y C pero no HS, no afecta la capacidad descondensante de los mismos (40% con enzima vs. 46% sin). Estos resultados constituyen las primeras evidencias en la literatura acerca de la presencia de HS dentro del ovocito y apoyan la hipótesis de que podría funcionar como aceptor de protaminas in vivo.