Primeros indicios de la presencia de heparan-sulfato, posible agente descondensante del espermatozoide humano in vivo, en el ovocito

ROMANATO, M.; REGUEIRA, E.; ZAPPI, M.; DE DIOS, C.; CALVO, L.; CALVO, J.C.

Buenos Aires, Argentina

Congreso; XX Reunión Bienal de la Asociación Latinoamericana de Investigadores en Reproducción Humana (ALIRH); 2007

Los espermatozoides humanos se descondensan in vitro con heparina (Hep) y glutation (GSH). Estudios previos de nuestro laboratorio indican que in vitro, el heparán sulfato (HS), análogo estructural de Hep, pero no así otros glicosaminoglanos (GAGs), presenta actividad descondensante similar a Hep y hemos propuesto que HS actuaría in vivo como aceptor de protaminas. El objetivo de este trabajo fue investigar mediante dos estrategias distintas la presencia de HS en el ovocito. Metodología: se utilizaron espermatozoides capacitados, provenientes de muestras de donantes normospérmicos (OMS) y ovocitos frescos obtenidos de ratonas CF1 de 8 semanas estimuladas con PMSG (5 UI) y hCG (5 UI). Se recuperaron los ovocitos del oviducto y se eliminaron células del cúmulos  (hialuronidasa 0,1% en PBS) y zona pelúcida (tirodes ácido pH= 2,5). 1) ovocitos fijados con metanol, se marcaron con Rubipy (Cloruro de tris (2,2´-bipiridina) Rutenio (II)) 1 mg/ml en agua destilada a pH 1,5 (marcación específica de grupos sulfato). 2) se descondensaron espermatozoides in vitro entre porta y cubreobjetos en presencia de Hep 46 mM + GSH mM u ovocitos rotos por presión mecánica + GSH 10 mM durante 3,5 h. Como control se descondensaron espermatozoides en tubo en las condiciones habituales (Hep/GSH). Resultados y conclusiones: 1)  El análisis con microscopía confocal reveló localización citoplasmática de HS en el 100% de los ovocitos observados. 2) No se encontraron diferencias significativas entre la descondensación de espermatozoides en presencia de ovocitos (55± 7%) vs. Hep+GSH (50±6%, n=8, Paired Student, p=0.502).  El agregado de heparinasa (10 mUI/ml) disminuye significativamente la capacidad descondensante de los ovocitos (16± 13% vs. 56±12%, n=4, Paired Student, p=0,04). En cambio no se observó efecto alguno ante el agregado de condroitinasa ABC (100mUI/ml) (48±11 vs 58±4, n=4, Paired Student, p=0.528) o hialuronidasa (2 UI/ml) (39±8 vs. 42±7, n=4, Paired Student, p=0.716).  Estos resultados constituyen las primeras evidencias en la literatura acerca de la presencia de HS dentro del ovocito y reafirman nuestra hipótesis de trabajo: que el HS sería el aceptor de protaminas durante la descondensación del espermatozoide humano in vivo.