Desarrollo y validación de una metodología para el estudio en ratas de los perfiles plasmáticos de AZT y de nuevos derivados de AZT

QUEVEDO, M.A.; BRIÑÓN, M.C.

Buenos Aires, Argentina

Congreso; X Congreso Argentino de Farmacia y Bioquímica Industrial; 2005

Asociación Argentina de Farmacia y Bioquímica Industrial

Desarrollo y Validación de una Metodología para el Estudio en Ratas de los Perfiles Plasmáticos de AZT y de Nuevos Derivados de AZT   Mario A. Quevedo*, Margarita C. Briñón Departamento de Farmacia ? Facultad de Ciencias Químicas ? U.N.C. *alfredoq@dqo.fcq.unc.edu.ar   Objetivos e Introducción La zidovudina (3'-azido-3'-deoxitimidina), es un inhibidor nucleosídico de la enzima viral transcriptasa reversa, utilizada actualmente en el tratamiento del Síndrome de la Inmunodeficiencia Adquirida (SIDA). Considerando que existen diversos aspectos farmacocinéticos subóptimos de esta droga (entre ellos una escasa unión a proteínas plasmáticas, corto tiempo de vida media plasmático (t1/2), baja penetración a SNC, etc), y que ellos dan lugar a la aparición de importantes efectos adversos, es que nuestro grupo de trabajo se encuentra abocado a la obtención de nuevos derivados tendientes a la optimización de sus propiedades farmacocinéticas. En base a ello, en este trabajo se presenta la obtención del perfil plasmático en ratas de AZT. Para ello, se desarrolló y validó una metodología directamente aplicable al estudio de los nuevos derivados obtenidos en nuestro grupo de trabajo.   Materiales y Métodos Se utilizaron ratas Wistar de 300-350 g. anestesiadas con uretano i.p. (1000 mg/kg). Se canuló la vena femoral derecha y arteria femoral izquierda, administrando dosis de AZT (0,3 ml ; 20 mg/kg) y tomando muestras de sangre (0,15 ml) a 10, 20, 30, 40, 60, 80, 100 y 120 min. Se centrifugaron las muestras y a 50 ml de plasma fueron sometidos a extracción en fase sólida, eluyendo posteriormente con AcN. Se llevó la muestra a sequedad y se almacenó el residuo en una atmósfera seca hasta su análisis.  Se cuantificó por HPLC con detección UV (267 nm), en un equipo Agilent s1100, empleando una columna Synergi 4 mm Fusion C18, fase móvil buffer fosfato pH 2,5:MeOH:THF (68:30:2), 1 ml/min, 35 °C. La muestra se resuspendió en AcCN/H2O (25:75). Se tomaron  4 muestras por cada animal (0,6 ml totales), por triplicado para cada tiempo muestreado. Luego de la cuantificación, se graficó el log de la concentración vs. tiempo, y se calculó el t1/2  a partir de la pendiente resultante.   Resultados En las condiciones cromatográficas establecidas para AZT se logró una resolución (R = 14,2) y un factor de capacidad (k´ = 2,2) adecuados considerando las sustancias endógenas presentes en la matriz plasmática. Para el método de cuantificación se determinó que la respuesta fue lineal entre 1,07-73,00 mM, con un límite de detección y cuantificación de 0,89 y 1,07 mM, respectivamente. Se obtuvieron porcentajes de recuperación aceptables para la metodología empleada en la preparación y cuantificación de la muestra: 54,00 mM = 97,86 % (sd= 2,05; n=3) y 382,00 mM = 97,18% (sd = 3,91; n=3). Se determinó un tiempo de vida media para AZT de 1,56 (± 0,14) hs. El método de cuantificación y preparación de la muestra fue extendido al derivado AZT-Iso, hallando resoluciones cromatográficas adecuadas respecto de AZT y los compuestos endógenos, así como también recuperaciones adecuadas desde la matriz plasmática (96,4 %, sd= 6,91; 50 µM).   Conclusiones La metodología desarrollada fue apropiada para la determinación del tiempo de vida media de AZT in vivo, encontrando valores de t1/2 comparables a los informados en bibliografía. Por otra parte, las condiciones de ensayo establecidas en el presente trabajo, se desarrollaron específicamente teniendo en cuenta las propiedades fisicoquímicas y la estabilidad química y enzimática de nuestros nuevos derivados de AZT. En base a los resultados obtenidos, la metodología empleada puede aplicarse directamente al estudio de los perfiles plasmáticos in vivo de estos nuevos derivados.