Efectos sobre la viabilidad celular de un extracto de hojas de la planta tóxica Senecio grisebachii Baker (?margarita de campo?, Asteraceae)

BECERRA V; GAMBARO R; PADULA G; SEOANE A; RAINERI E; PALACIOS A; ZEINSTEGER P

Congreso; XXI Congreso Argentino de Toxicología ?Creando oportunidades frente a los nuevos desafíos desde la Toxicología?; 2019

El género Senecio se halla ampliamente distribuido a nivel mundial y algunas de sus especies son tóxicas debido a la presencia de alcaloides pirrolizidínicos (AP). La intoxicación en humanos se asocia al consumo de infusiones y en animales domésticos a la ingestión de plantas durante las épocas de sequía. Los AP son agentes alquilantes con efecto antimitótico que provocan megalocitosis en hepatocitos, proliferación ductal y fibrosis (enfermedad veno-oclusiva). En Argentina, Senecio grisebachii Baker (SG, ?margarita de campo?, Asteraceae) crece en las regiones Central y Nordeste del país. El objetivo de este trabajo fue evaluar el efecto del extracto de hojas de SG sobre la viabilidad celular de linfocitos bovinos. El extracto fue preparado a partir de 15 gr de hojas secas y diluido en 200 ml de metanol utilizando agitador magnético durante 24 horas a temperatura ambiente, luego se rota-evaporó a sequedad, se resuspendió con HCl 1% y se alcalinizó con NH3 25%. Finalmente se realizó una extracción con cloroformo:metanol (4:1), rota evaporación y evaporación final a sequedad bajo atmósfera de nitrógeno, re-suspendiendo finalmente en 10 ml de DMSO. La presencia de AP se evidenció mediante reactivo de Ehrlich y cromatografía en capa delgada. Para evaluar la viabilidad se utilizó el ensayo MTT que consiste en una evaluación colorimétrica de la actividad mitocondrial. Para ello se utilizaron linfocitos de sangre periférica bovina estimulados con 100 μg/ml de fitohemaglutinina y cultivados en medio Ham F12 suplementado con suero fetal bovino y antibióticos a 37 ºC durante 48 horas. Los tratamientos se realizaron en las últimas 24 horas. La actividad mitocondrial se evaluó indirectamente por medio de espectrofotometría (Técnica de Elisa) midiendo la absorbancia a 550nm. Los tratamientos fueron: 1) control negativo 2) control positivo (metanol 10%) 3) control diluyente (0,1% DMSO); y extracto de hojas de SG 4) 200 μg/mL 5) 400 μg/mL 6) 600 μg/mL 7) 800 μg/mL y 1000 μg/mL. Los resultados indican ausencia de efectos sobre la viabilidad celular para todas las concentraciones ensayadas. Estos resultados resultaron contrapuestos a los publicados recientemente con respecto al efecto provocado por un extracto de flores de SG que, aún en concentraciones más bajas, indujo disminución de la actividad enzimática de deshidrogenasas mitocondriales y reductasas citosólicas y consecuentemente de la viabilidad celular. Si bien se requerirán nuevos estudios para explicar estos hallazgos, se sugiere que el efecto antagonista de dos AP presentes en el extracto de hojas de SG sería el responsable de la ausencia de toxicidad observada.