Endosimbiontes obligados (yeast-like symbionts) del vector Delphacodes kuscheli (Hemiptera: Delphacidae). Cultivo e identificación.

BRENTASSI, M.E.; TOLEDO, A.V.; MEDINA, R.; DE LA FUENTE, D.; FRANCO, E.; BALATTI, P.A.

Congreso; X Congreso Argentino de Entomología; 2018

Los hemípteros delfácidos incluyen a especies vectoras de enfermedades a cereales. Estos insectos establecen asociaciones simbióticas obligadas con organismos conocidos como yeast-like symbionts (YLS) (Fungi) que complementan sus dietas nutricionalmente desbalanceadas (savia floemática). Los YLS se transmiten transováricamente y son indispensables para el desarrollo de estos insectos. En estudios previos realizados en Delphacodes kuscheli, principal vector del Mal de Río Cuarto del maíz en Argentina, se identificaron organismos morfológicamente similares a los YLS en el tejido graso abdominal y en los huevos. El objetivo de este trabajo fue aislar endosimbiontes cultivables in vitro e identificarlos en base a características morfológicas y a secuencias de su genoma. Los YLS se obtuvieron a partir de huevos extraídos desde posturas endofíticas, esterilizados superficialmente con alcohol 70% e hipoclorito de sodio al 0.5%, y macerados con micropistilos estériles en agua destilada estéril. Alícuotas de las suspensiones se sembraron en placas de Petri conteniendo medios de cultivo Sabouraud dextrosa agar enriquecido con 1% de extracto de levaduras (SDAY 1%), agar extracto de malta 2% (AEM 2%), agar sacarosa con el agregado de 4% de harina de amaranto (AS amaranto 4%) y agar sacarosa con el agregado de 4% de harina de chía (AS chía 4%). Luego de un período de incubación de 4 días a 25 y a 28 °C se desarrollaron colonias que fueron caracterizadas morfológica y molecularmente y preservadas a 4 °C. Cuatro colonias puras de YLS que desarrollaron en medios SDAY y AEM se caracterizaron con marcadores ISSR (primers AA5, FA5y LA5) registrándose dos patrones de bandas diferentes. A un representante de cada perfil genético encontrado se lo identificó amplificando y secuenciando el ITS (ITS5 e ITS4). La amplificación generó dos fragmentos de ADN de 560 pb cuyas secuencias presentaron 100% de similitud con Naganishia diffluens (=Cryptococcus diffluens) (Basidiomycota, Tremellomycetes). El género Cryptococcus ha sido descripto como un Cryp-Like Symbiote en Nilaparvata lugens, delfácido plaga del arroz en Asia. La metodología utilizada en este trabajo permitió cultivar e identificar por primera vez a un endosimbionte del tipo YLS aislado a partir de D. kuscheli.