Caracterizacion de los mecanismos involucrados en la capacitacion de espermatozoides de Xenopus laevis

COUX, GABRIELA ; CABADA, MARCELO O. ; VISCONTI, PABLO E.

Mar del Plata

Congreso; L Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica; 2005

Sociedad Argentina de Investigación Clínica

<!-- /* Font Definitions */ @font-face {font-family:SimSun; panose-1:2 1 6 0 3 1 1 1 1 1; mso-font-alt:宋体; mso-font-charset:134; mso-generic-font-family:auto; mso-font-format:other; mso-font-pitch:variable; mso-font-signature:1 135135232 16 0 262144 0;} @font-face {font-family:"@SimSun"; panose-1:0 0 0 0 0 0 0 0 0 0; mso-font-charset:134; mso-generic-font-family:auto; mso-font-format:other; mso-font-pitch:variable; mso-font-signature:1 135135232 16 0 262144 0;} /* Style Definitions */ p.MsoNormal, li.MsoNormal, div.MsoNormal {mso-style-parent:""; margin:0cm; margin-bottom:.0001pt; mso-pagination:widow-orphan; font-size:12.0pt; font-family:"Times New Roman"; mso-fareast-font-family:SimSun; mso-fareast-language:ZH-CN;} @page Section1 {size:612.0pt 792.0pt; margin:72.0pt 90.0pt 72.0pt 90.0pt; mso-header-margin:36.0pt; mso-footer-margin:36.0pt; mso-paper-source:0;} div.Section1 {page:Section1;} --> Para poder ser fecundante el espermatozoide de mamíferos debe atravesar el proceso de capacitación que se caracteriza por producir hiperpolarización, aumento del AMPc y aumento de la fosforilación de proteínas entre otros eventos. El anfibio Xenopus laevis posee fecundación externa, pero sus espermatozoides requieren de un medio de baja osmolaridad para ser motiles y de factores difusibles (FD) de las envolturas de los ovocitos para poder tener éxito en la fecundación. Nuestro objetivo fue analizar si la adquisición de motilidad y de capacidad fecundante del espermatozoide de X. laevis se asocia con alguno de los eventos descriptos para la capacitación de mamíferos. Se midió el potencial de membrana de los espermatozoides mediante el uso del fluoróforo DiSC3(5), valinomicina y KCl y no se detectaron cambios con la dilución (concentrado= 89.2 +5.7, diluido =99.2+6.9 mV, n=3-5). Se analizó el nivel de fosforilación en tirosina mediante western blot. Se observo un aumento de la fosforilación en tirosina en proteínas de entre 30 y 50 kDa al pasar los espermatozoides a un medio diluido. La adición de FD al medio diluido provoco aparición de una banda fosforilada de cerca de 20kDa. Esta banda no se detectó cuando los FD se incorporaron a los espermatozoides en medio concentrado y además, esta banda fue detectable cuando los FD se sembraron en ausencia de espermatozoides. La inclusión de dibutiril-AMP e IBMX en los medios no produjo cambio respecto de lo observado. Finalmente se analizó la fosforilación de proteínas en treonina y serina mediante western blot. Se vio el aumento en fosforilación de proteínas de entre 75-100 kDa y la desaparición de bandas fosforiladas entre los 37-50 kDa al pasar los espermatozoides a medio diluido. Nuestros datos sugieren que los espermatozoides de X. laevis comparten algunos de los cambios asociados a la capacitación de mamíferos, como el aumento de la fosforilación de proteínas pero que esto no estaría mediado por hiperpolarización o AMPc.