Caracterización molecular, análisis filogenéticos y de coalescencia de cepas del complejo Encefalitis Equina Venezolana (VEEV) aisladas en Argentina

PISANO, MB; TORRES, C.; RÉ, V.; FARÍAS, AA; CAMPOS, R.H.; CONTIGIANI, M.

Congreso; XIII Congreso Argentino de Microbiología; 2013

La encefalitis equina Venezolana (EEV) es una arbovirosis re-emergente en los trópicos, debilitante y en ocasiones fatal para los humanos, causada por virus pertenecientes al complejo del mismo nombre. En Argentina, no se han registrado brotes por cepas epizoóticas, pero se conoce circulación de virus enzoóticos pertenecientes a este complejo en el norte del país. En 1980 se aisló por primera vez Virus Río Negro (RNV) (VEEV subtipo VI) a partir de mosquitos de Chaco. En 1989 se registró un brote de enfermedad tipo dengue en humanos de la isla Gral. Belgrano, Formosa, y en 1991 RNV y virus Pixuna (PIXV) (VEEV subtipo IV) fueron aislados de roedores de la misma isla. En la década de 2000, ambos virus fueron detectados en Chaco (2003 y 2004) y Tucumán (2005), y RNV en Córdoba (2005). En este trabajo se realizó la caracterización molecular y análisis evolutivo de las cepas argentinas mencionadas. Para ello se realizó la secuenciación de las regiones genómicas nsP4 (169pb) y PE2 (701pb) y se realizaron análisis filogenéticos por distancias y máxima verosimilitud con los programas MEGA 4.0 y PhyML 3.0. Además, se estimó la edad del ancestro común más reciente (ACMR) y la tasa de sustitución para RNV mediante análisis de coalescencia con el programa BEAST 1.7.2. Siete cepas aisladas en 1980 y 2 en 1991 fueron secuenciadas en las regiones genómicas mencionadas. Otras 3 de 1991, junto con las correspondientes a la década de 2000 -de las que ya se contaba con las secuencias obtenidas de la región nsP4, y que fueron incluidas en el análisis-, no pudieron ser amplificadas en la región PE2, probablemente debido al bajo límite de detección de la técnica, ya que estas cepas no pudieron ser aisladas. Los árboles filogenéticos obtenidos para ambas regiones y con ambos métodos mostraron topologías similares: ausencia de linajes definidos por especie, fecha, o lugar de procedencia para el clado RNV; y presencia de dos grupos dentro de la rama de PIXV, correspondientes a la cepa brasilera y las cepas argentinas. Los análisis de coalescencia fueron realizados utilizando un modelo demográfico constante y un reloj molecular estricto. Se estimó la edad del ACMR de RNV (desde 1991) en 56,2 años (95% HPD 12,8-399,6), que indicó que los eventos de divergencia para este grupo habrían comenzado a ocurrir alrededor del año 1935. La tasa de sustitución estimada fue de 9,9x10¯5 (95% HPD,5,0x10¯6 - 4,1x10¯4) sustituciones/sitio/año, del mismo orden de magnitud que la estimada para otros virus enzoóticos del complejo VEEV. Los resultados obtenidos mostraron que las cepas argentinas de VEEV estudiadas presentan alto grado de conservación genética, lo que disminuiría la posibilidad de emergencia de cepas patógenas vía mutación de cepas enzoóticas. Sin embargo, es necesario continuar con estudios que incluyan cepas más recientes a fin de determinar la divergencia en regiones genómicas claves para estos procesos, como también la vigilancia de casos clínicos tipo dengue.