Regulación de la proteína de unión al RNA TcUBP1 y su impacto en el perfil transcriptómico de Trypanosoma cruzi

DE GAUDENZI, JAVIER G.

La Plata

Congreso; XXXIV Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Protozoología; 2023

Sociedad Argentina de Protozoología

A lo largo de su complejo ciclo de vida, Trypanosoma cruzi alterna entre un hospedador mamífero y un insecto vector, por lo que debe adaptarse rápidamente a los diferentes ambientes que enfrenta. Durante este ciclo, los cambios en la expresión de la proteína reguladora TcUBP1 —del inglés T. cruzi U-rich RNA-binding protein 1— desempeñan un papel crucial. TcUBP1 es una proteína de unión al RNA exclusiva de tripanosomas que reconoce un elemento estructural caracterísitico denominado UBP1m localizado en las regiones 3′-no codificante de sus transcriptos blancos. Anteriormente, hemos demostrado que la sobreexpresión ectópica de TcUBP1 en células CL Brener epimastigotes desencadena un perfil de expresión que se asemeja a las formas infectivas y duplica la infectividad de los trypomastigotes derivados de células. En un intento por generar parásitos knockout para TcUBP1 utilizando la tecnología CRISPR-Cas9, obtuvimos una variante con su extremo N-terminal mutado. La expresión de esta forma mutante de TcUBP1 se vio notablemente disminuida en En comparación con la forma endógena expresada en los parásitos salvajes. Sin embargo, el análisis de microscopía mostró una morfología normal de las células epimastigotes así como la localización del núcleo y el kinetoplasto. Del mismo modo, las curvas de crecimiento y la diferenciación de epimastigotes a tripomastigotes metacíclicos presentaron valores similares al control spCas9. A continuación, realizamos experimentos de RNA-seq con la población disminuida (KD), sobreexpresante (OE) y salvaje, lo que nos permitió identificar 26 genes regulados al alza y 67 genes regulados a la baja con respecto a la muestra control (|log2 fold change| >1, FDR