INFORME TECNICO. PRODUCCION Y VALIDACION DEL SUERO ANTICLOROTIROSINA

DI SCIULLO MARÍA PAULA

2022-03-01/2023-08-28

1-11

Biológica

Prom.Gral.del Conoc.-Cs.Medicas

La clorotirosina es un marcador específico de la formación de HOCl en los tejidos y se asocia a la patogénesis de varias patologías relevantes como la enfermedad aterosclerótica cardiovascular, enfermedades respiratorias crónicas, neurodegenerativas y cáncer. Su detección es dificultosa por ser un producto poco abundante in vivo, por ello es importante la generación de una herramienta más accesible y económica para su determinación. En esta contribución se presenta la metodología, procedimientos y resultados de la producción y validación del suero anti-clorotirosina (ClTyr) generado en conejos, en el Laboratorio de Medicina Experimental y Traduccional del IMIBIO-SL, dirigido por el Dr. Darío Ramírez durante los años 2022 y 2023. El objetivo fue obtener anticuerpos anti-ClTyr para ser ofrecidos a otros grupos de investigación y equipos de docencia de la UNSL y colaboradores, o en convenios de transferencia tecnológica sólo para uso en investigación. Se inmunizaron conejos con la proteína albúmina sérica bovina clorinada con 33mM (lote L) o 300mM (lote H) de HOCl. El rendimiento proteico de los sueros fue evaluado por el método de Bradford y Western Blot y su especificidad fue estudiada por la técnica de ELISA. La especificidad de los lotes obtenidos fue demostrada, ya que no reconocieron otras proteínas no clorinadas. Sólo el lote L fue eficaz en reconocer el antígeno de su inóculo diluido hasta mil veces. En cambio, sólo el lote H fue efectivo para reconocer proteínas clorinadas en tejidos en un título 1/1000. Se observó un rendimiento proteico menor en los sueros pertenecientes a los animales inmunizados respecto a los controles. El análisis de los sueros por western blot y ELISA demostró una baja especificidad de los mismos con mucho ruido de fondo o background por estas técnicas. Por este motivo, se recomienda realizar una purificación de los anticuerpos y una nueva validación de los mismos para comprobar su efectividad..