Desarrollo de Sistemas Moleculares de Identificación individuo-específico en un Primate Neotropical: Alouatta caraya.

OKLANDER LI, MARINO M, CORACH D.

Malargüe, Mendoza, ARGENTINA

Congreso; 33° Congreso Argentino de Genética; 2004

Sociedad Argentina de Genética

La biología molecular permite estudiar parámetros demográficos y reproductivos de poblaciones de animales silvestres. El uso de los microsatélites posibilitó el análisis de parentesco, flujo génico y endogamia en numerosas especies de primates del viejo mundo. Los microsatélites humanos permiten amplificar secuencias en simios y catarrinos, pero dejan de ser útiles para especies más lejanas evolutivamente, como los Platirrinos. En consecuencia existen pocos estudios moleculares en primates neotropicales, ya que requieren un aislamiento de microsatélites especie-específicos. Con el objeto de desarrollar un sistema molecular de identificación para la especie Alouatta caraya realizamos una genoteca genómica, enriquecida en secuencias repetidas. Se utilizaron dos técnicas de hibridización selectiva para el enriquecimiento: Vectrex@ AvidinD y Dynabeads@M-280 Streptavidin. El ADN genómico fue digerido con Sau3AI. Se seleccionaron los fragmentos mayores a 400pb utilizando columnas de filtración y se ligaron a adaptadores Sau 3AI que se usaron como iniciadores para amplificarlos mediante PCR. Los fragmentos obtenidos se desnaturalizaron y se sometió una parte a una hibridación con fragmentos biotinilados [(CA)15 TATAAGATA- Biotina, y otra parte con [(AGAT)´5TATAAGATA- Biotina. El rescate de las secuencias conteniendo dinucleótidos se realizó mediante Vectrex AvidinD, y las conteniendo tetranucleótidos mediante Dynabeads. Las secuencias enriquecidas fueron clonadas en E.coli mediante TOPO TA Cloning Kit. Se seleccionaron los clones positivos mediante sondas marcadas quimioluminiscentemente. Se obtuvieron 11 clones con secuencias (CA)n y 9 con (AGAT)n. Para ambas repeticiones se obtuvieron fragmentos entre los 500-1000pb. Los clones están siendo actualmente secuenciados para desarrollar sistemas que permitan analizar parámetros poblacionales de esta especie de Platirrinos.