ESTUDIO INMUNOHISTOQUÍMICO DE LAS ALTERACIONES DE LOS TUBOS TESTICULARES DE Fasciola hepatica EXPUESTA A TRICLABENDAZOLE

SCARCELLA S., FELIPE A., ALZOLA R., FIEL C., SAUMELL C., GENTILE M Y SOLANA H.

FCV-UBA. Buenos Aires

Jornada; XVIII Jornadas Argentinas y XIII Jornadas Latinoamericanas de Farmacotoxicología Veterinaria; 2008

La fasciolasis es una zoonosis producida por el trematodo Fasciola hepatica. Es una parasitosis intrahepática de distribución cosmopolita que se manifiesta en casi todas las zonas en donde habitan ovejas y otros rumiantes. Dicha parasitosis ha pasado a ser un grave problema para la población humana suburbana que habita en países subdesarrollados de zonas tropicales y subtropicales. Ante una fasciolasis se indica como droga de elección al Triclabendazole (TCBZ), un antihelmíntico en donde uno de los mecanismo de acción descriptos hasta el presente es su unión a b tubulina del helminto con la consecuente despolimerización de sus microtúbulos desencadenando la pérdida de función y muerte. El objetivo del presente trabajo fue analizar con técnicas de histopatología e inmunohistoquímica, las alteraciones generadas en los tubos testiculares de F. hepatica  expuestas “in vivo” a triclabendazole, analizando simultáneamente el involucramiento que podrían tener sus microtúbulos en dicho efecto. Se inocularon 4 bovinos sanos sin antecedentes de fasciolasis con 400 metacercarias cada uno. Dos de los bovinos inoculados (controles) se mantuvieron sin tratamiento siendo sacrificados a los 105 días post inoculación. Los restantes (experimentales) fueron tratados a los 90 días post infección con 8 mg/Kg p.v de TCBZ (Laboratorios Microsules) y sacrificados al día 105. Se colectaron los diferentes especímenes de Fasciola hepatica procesándose inmediatamente para su análisis histopatológico e inmunohistoquímico. Para dichos estudios se realizaron cortes de 5 mm coloreándose para histopatología con hematoxilina de Mayer y eosina y para inmunohistoquímica según el método de Peroxidasa-antiperoxidasa (Método PAP) utilizando como primer anticuerpo monoclonales Sigma ® dirigidos contra b y α tyr tubulina. Cuando se analizaron los tubos testiculares de las fasciolas del grupo control (bovinos no tratados) los mismos se presentaron llenos de células en distintos estadíos de la espermatogénesis. En la periferia, se visualizaron espermatogonias I y II y células basófilas con núcleo grande. Hacia el centro de los túbulos se localizaron espermatogonias III, espermatocitos I y II (con núcleo periférico) y espermatozoides. Al analizar las fasciolas expuestas a la droga, se observó una marcada pérdida de la línea espermatogénica con una manifiesta vacuolización periférica, desorganización y reducción de los tipos celulares. En el análisis inmunohistoquímico, se observó en los controles una homogénea distribución de β tubulina y una particular distribución de a tyr tubulina con manifiesta expresión en la primera línea de la espermatogenesis. En los animales tratados se observó una significativa disminución de la expresión de ambas tubulinas con inmunomarcación difusa. Los hallazgos histopatológicos se corroboraron con los inmunohistoquímicos, confirmando que TCBZ altera la distribución de los microtúbulos teniendo implicancias directas en el entendimiento de las diferentes susceptibilidades de los helmintos y aportando a la comprensión de los mecanismos de resistencia antiparasitaria. Constituyen además un aporte a la interpretación de la actividad fasciolicida de TCBZ siendo parte de un proyecto general que se desarrolla en nuestros laboratorios tendiente a la ampliación de conocimientos referidos al mecanismo de acción de los antihelmínticos benzimidazólicos La fasciolasis es una zoonosis producida por el trematodo Fasciola hepatica. Es una parasitosis intrahepática de distribución cosmopolita que se manifiesta en casi todas las zonas en donde habitan ovejas y otros rumiantes. Dicha parasitosis ha pasado a ser un grave problema para la población humana suburbana que habita en países subdesarrollados de zonas tropicales y subtropicales. Ante una fasciolasis se indica como droga de elección al Triclabendazole (TCBZ), un antihelmíntico en donde uno de los mecanismo de acción descriptos hasta el presente es su unión a b tubulina del helminto con la consecuente despolimerización de sus microtúbulos desencadenando la pérdida de función y muerte. El objetivo del presente trabajo fue analizar con técnicas de histopatología e inmunohistoquímica, las alteraciones generadas en los tubos testiculares de F. hepatica  expuestas “in vivo” a triclabendazole, analizando simultáneamente el involucramiento que podrían tener sus microtúbulos en dicho efecto. Se inocularon 4 bovinos sanos sin antecedentes de fasciolasis con 400 metacercarias cada uno. Dos de los bovinos inoculados (controles) se mantuvieron sin tratamiento siendo sacrificados a los 105 días post inoculación. Los restantes (experimentales) fueron tratados a los 90 días post infección con 8 mg/Kg p.v de TCBZ (Laboratorios Microsules) y sacrificados al día 105. Se colectaron los diferentes especímenes de Fasciola hepatica procesándose inmediatamente para su análisis histopatológico e inmunohistoquímico. Para dichos estudios se realizaron cortes de 5 mm coloreándose para histopatología con hematoxilina de Mayer y eosina y para inmunohistoquímica según el método de Peroxidasa-antiperoxidasa (Método PAP) utilizando como primer anticuerpo monoclonales Sigma ® dirigidos contra b y α tyr tubulina. Cuando se analizaron los tubos testiculares de las fasciolas del grupo control (bovinos no tratados) los mismos se presentaron llenos de células en distintos estadíos de la espermatogénesis. En la periferia, se visualizaron espermatogonias I y II y células basófilas con núcleo grande. Hacia el centro de los túbulos se localizaron espermatogonias III, espermatocitos I y II (con núcleo periférico) y espermatozoides. Al analizar las fasciolas expuestas a la droga, se observó una marcada pérdida de la línea espermatogénica con una manifiesta vacuolización periférica, desorganización y reducción de los tipos celulares. En el análisis inmunohistoquímico, se observó en los controles una homogénea distribución de β tubulina y una particular distribución de a tyr tubulina con manifiesta expresión en la primera línea de la espermatogenesis. En los animales tratados se observó una significativa disminución de la expresión de ambas tubulinas con inmunomarcación difusa. Los hallazgos histopatológicos se corroboraron con los inmunohistoquímicos, confirmando que TCBZ altera la distribución de los microtúbulos teniendo implicancias directas en el entendimiento de las diferentes susceptibilidades de los helmintos y aportando a la comprensión de los mecanismos de resistencia antiparasitaria. Constituyen además un aporte a la interpretación de la actividad fasciolicida de TCBZ siendo parte de un proyecto general que se desarrolla en nuestros laboratorios tendiente a la ampliación de conocimientos referidos al mecanismo de acción de los antihelmínticos benzimidazólicos La fasciolasis es una zoonosis producida por el trematodo Fasciola hepatica. Es una parasitosis intrahepática de distribución cosmopolita que se manifiesta en casi todas las zonas en donde habitan ovejas y otros rumiantes. Dicha parasitosis ha pasado a ser un grave problema para la población humana suburbana que habita en países subdesarrollados de zonas tropicales y subtropicales. Ante una fasciolasis se indica como droga de elección al Triclabendazole (TCBZ), un antihelmíntico en donde uno de los mecanismo de acción descriptos hasta el presente es su unión a b tubulina del helminto con la consecuente despolimerización de sus microtúbulos desencadenando la pérdida de función y muerte. El objetivo del presente trabajo fue analizar con técnicas de histopatología e inmunohistoquímica, las alteraciones generadas en los tubos testiculares de F. hepatica  expuestas “in vivo” a triclabendazole, analizando simultáneamente el involucramiento que podrían tener sus microtúbulos en dicho efecto. Se inocularon 4 bovinos sanos sin antecedentes de fasciolasis con 400 metacercarias cada uno. Dos de los bovinos inoculados (controles) se mantuvieron sin tratamiento siendo sacrificados a los 105 días post inoculación. Los restantes (experimentales) fueron tratados a los 90 días post infección con 8 mg/Kg p.v de TCBZ (Laboratorios Microsules) y sacrificados al día 105. Se colectaron los diferentes especímenes de Fasciola hepatica procesándose inmediatamente para su análisis histopatológico e inmunohistoquímico. Para dichos estudios se realizaron cortes de 5 mm coloreándose para histopatología con hematoxilina de Mayer y eosina y para inmunohistoquímica según el método de Peroxidasa-antiperoxidasa (Método PAP) utilizando como primer anticuerpo monoclonales Sigma ® dirigidos contra b y α tyr tubulina. Cuando se analizaron los tubos testiculares de las fasciolas del grupo control (bovinos no tratados) los mismos se presentaron llenos de células en distintos estadíos de la espermatogénesis. En la periferia, se visualizaron espermatogonias I y II y células basófilas con núcleo grande. Hacia el centro de los túbulos se localizaron espermatogonias III, espermatocitos I y II (con núcleo periférico) y espermatozoides. Al analizar las fasciolas expuestas a la droga, se observó una marcada pérdida de la línea espermatogénica con una manifiesta vacuolización periférica, desorganización y reducción de los tipos celulares. En el análisis inmunohistoquímico, se observó en los controles una homogénea distribución de β tubulina y una particular distribución de a tyr tubulina con manifiesta expresión en la primera línea de la espermatogenesis. En los animales tratados se observó una significativa disminución de la expresión de ambas tubulinas con inmunomarcación difusa. Los hallazgos histopatológicos se corroboraron con los inmunohistoquímicos, confirmando que TCBZ altera la distribución de los microtúbulos teniendo implicancias directas en el entendimiento de las diferentes susceptibilidades de los helmintos y aportando a la comprensión de los mecanismos de resistencia antiparasitaria. Constituyen además un aporte a la interpretación de la actividad fasciolicida de TCBZ siendo parte de un proyecto general que se desarrolla en nuestros laboratorios tendiente a la ampliación de conocimientos referidos al mecanismo de acción de los antihelmínticos benzimidazólicos