Selección de cepas aisladas de rizosfera y nódulos de maní productoras de EPS: potencial uso en biotecnología.

MEYER J; MEDEOT D; PAULUCCI N; BUENO M; GARCÍA M

UNRC

Jornada; VI Reunion Nacional Científico Técnica del Suelo y VI Encuentro sobre FBN; 2007

REBIOS

En las diferentes etapas del proceso de interacción que tiene lugar entre plantas y microorganismos, están involucrados componentes bacterianos que son considerados de gran relevancia simbiótica (Perret et al, 2000),  dentro de los cuales se encuentran los polisacáridos extracelulares (EPS). El papel específico de estas biomoléculas depende del ambiente, sugiriéndose que la habilidad de los microorganismos para producirlas es una respuesta a las presiones selectivas del medio ambiente (Phillips, 1989). El objetivo del presente trabajo fue seleccionar cepas altamente productoras de EPS a partir de muestras de suelo y raíces de maní (Arachis hypogaea),  realizar estudios fisiológicos y bioquímicos de las cepas seleccionadas y análisis de componentes superficiales como EPS para posteriormente seleccionar aquéllas que puedan ser usadas en posibles aplicaciones biotecnológicas. El aislamiento se realizó a partir de muestras de suelos y de raíces de maní noduladas, recolectadas de nuestra zona manisera. Se seleccionaron en base a su coloración de Gram, a la morfología de las colonias y a la producción de fluorescencia en placas adicionadas con calcofluor. Las cepas de colección y las aisladas fueron cultivadas a 28ª en medio YEM, el crecimiento fue determinado por turbidimetría y por viabilidad. Cultivos de 24 hs. se cosecharon por centrifugación. Los EPS se extrajeron a partir del sobrenadante por precipitación con etanol frío, se lavaron y  centrifugaron a 10000 rpm. Los componentes de los EPS crudos obtenidos fueron disueltos en una solución de ácido acético al 15% y cargados en una columna de Bio-Gel P-4. Se calculó el coeficiente de partición de la columna, Kav. El contenido total de carbohidratos fue determinado por el método de antrona utilizando glucosa como testigo. Se seleccionaron 3 cepas nativas Gram (-) que presentaron colonias mucosas y producción de fluorescencia en presencia de calcofluor, dos de ellas aisladas de nódulos (L5N23 y L3N23) y la tercera de rizosfera (L115). Las 3 cepas se comportaron como de crecimiento rápido, alcanzando la fase estacionaria a las 24 hs.y presentaron similares curvas de viabilidad, por lo que se eligió la cepa  Rhizobium TAL 1000, nodulante de maní,  como referencia para establecer comparaciones.  Cuando se graficó el contenido de hexosas (mg de hexosas/g de biomasa) en cada fracción en función de Kav se observó que las cepas aisladas de nódulo presentan patrón similar de EPS de alto peso molecular (PM) a diferencia de la cepa aislada de la rizosfera. En cuanto a los componentes de mediano y bajo PM, la cepa L5N23, presentó un patrón similar a la cepa de referencia. De lo anterior se desprende que esta cepa sería la candidata para la profundización de los estudios. Estos resultados son una primera aproximación para caracterizar cepas altamente productoras de EPS que podrían ser utilizadas con fines biotecnológicos.