DEGRADACIÓN DE TETRADECILTRIMETILAMONIO POR Pseudomonas putida A ATCC 12633 Y SU RELACIÓN CON SISTMAS REGULATORIOS GLOBALES

ANDRÉS S. LIFFOURRENA; GONZALO VELAZQUEZ; GLORIA I. LUCCHESI

Congreso; 2da Reunión Conjunta de Sociedades de Biología de la Republica Argentina; 2011

Pseudomonas putida A ATCC 12633 es capaz de utilizar el detergente tetradeciltrimetil amonio (TTAB) como única fuente de carbono y nitrógeno. El primer paso de la degradación de TTAB involucra la ruptura del enlace C-N por una actidvidad TTAB-monooxigenasa, dando como productos tetradecanal y trimetilamina (TMA). Con el objetivo de determinar la participación del sistema de dos componentes CbrAB en la regulación del metabolismo de TTAB y TMA en P. putida A ATCC 12633 a partir del DNA genómico de P. putida A ATCC 12633 se clonó una secuencia homóloga a un fragmento del gen pp4695, candidato de codificar para un sensor histidina kinasa. El análisis de la secuencia génica clonada, denominada hk, mostró una alta homología (90%) con el gen pp4695 de P. putida KT2440 y con el sensor CbrA descripto en P. aeruginosa. La secuencia  fue interrumpida por la inserción de un cassette de resistencia a gentamicina y, corroborada la mutación, se evaluó el comportamiento de la cepa mutante, P. putida A ATCC 12633 hk::Gm, en diferentes condiciones de cultivo. En medio rico, el crecimiento de la cepa mutante fue similar al obtenido con la cepa silvestre, pero en medio salino suplementado con glucosa o succinato y NH4Cl, fuentes preferenciales de carbono y nitrógeno, la cepa mutante presenta, respecto a la cepa parental, una fase de latencia y un tiempo de generación mayor y el crecimiento final obtenido es menor. Estos resultados sugieren que el sistema CbrAB afectaría la expresión de genes pertenecientes a las vías de utilización de glucosa o succinato. Por otro lado, se observó que la cepa mutante, a diferencia de la cepa silvestre, no fue capaz de crecer con el detergente TTAB utilizándolo como fuente de carbono, nitrógeno ó carbono y nitrógeno pero sí utiliza TMA como fuente de nitrógeno. Posiblemente, la inactivación del sensor histidina kinasa impide que esta cepa sea capaz de sensar la presencia del detergente y, en consecuencia, no se inducirían los genes necesarios para su utilización. El no detectar crecimiento cuando TMA es utilizada como fuente de carbono implicaría la participación del sistema CbrAB en su metabolismo.