Avances para la micropropagación de una geófita nativa con potencial ornamental: Rhodophiala bifida.

MARITANO, PATRICIA; GONZALEZ ROCCA, L; IRIGOYEN, E; MARINANGELI PABLO; ESCANDÓN, ALEJANDRO

Buenos Aires

Simposio; VIII Simposio Nacional de Biotecnología REDBIO Argentina 2011; 2011

REDBIO Argentina

1) Pretratamiento de plantas madres: Tras la recolección de material vegetal del JBAER se procedió al tratamiento de acuerdo al procedimiento siguiente: a). Lavado en agua corriente 1 h evitando desprender las catáfilas protectoras y raíces. b). Inmersión durante 2 hs en solución de Iprodione/Benomil 1:1 y secado al aire libre por 24 hs. c). Almacenado en perlita y fumigación durante 3 semanas consecutivas con una solución de Iprodine/Benomil 1:1, 2 veces por semana. 2) Desinfección de bulbos: los bulbos fueron removidos de la perlita y lavados en agua corriente y Tween80 durante 1 h retirándose las escamas protectoras y las raíces, luego fueron sumergidos en solución de Iprodione/Benomil 1:1 y 2 gotas de Tween80 por 2 hs con agitación y enjuagados con agua destilada estéril dentro del flujo laminar. A continuación se procedió según el método siguiente (Maritano et al, 2009): a). Inmersión en etanol 70% por 1 min, Cloro activo 1,2% + 2 gotas de Tween80 por 30 min y enjuague con agua destilada estéril dentro del flujo laminar. b). Remoción de las catáfilas externas evitando dañar el disco basal. c). Inmersión en Cloro activo 1,2 % + 2 gotas de Tween80 durante 30 min, enjuague con agua destilada estéril en flujo laminar y nueva remoción de catáfilas externas. 3) Establecimiento in vitro: luego de la desinfección, se procedió al aislamiento de las mitades superiores e inferiores de las catáfilas utilizando la técnica de Twin Scaling. La siembra de los explantos se llevó a cabo en medio Murashige and Skoog (1962) (MS) suplementado con 30 g/l de sacarosa, 7 g/l de agar y pH ajustado a 5,8. Los explantos fueron mantenidos en cámara de cultivo con una temperatura de 24± 2 ºC, fotoperíodo de 16 hs de luz y 52 μMol.m-2.seg-1. El medio base, condiciones de cultivo y cantidad de explantos por tratamiento (n:10, con 2 repeticiones) fueron iguales para el resto de los ensayos. 4) Estudio de los requerimientos hormonales in vitro. Con el objetivo de establecer un protocolo de multiplicación fueron experimentadas diferentes combinaciones de reguladores de crecimiento utilizando dos tipos de explantos: catáfilas inferiores (catáfilas dobles unidas por una porción del disco basal) y bulbitos generados in vitro por cultivo de catáfilas inferiores en medio libre de reguladores. Para cada uno se realizaron las siguientes pruebas todas sobre medio MS: Catáfilas inferiores (Twin scaling) : a. MS+ 2.65 μMol de ácido naftalenacético (ANA). b. + 2.2, 4.4 y 8.8 μMol de 6, bencil amino purina (BAP). c. + 10 y 20 μMol de Thidiazurom (TDZ) ó BAP. d. +0, 0.16, 0.33, 0.67, 1.32 y 2.65 µMol de ANA y e. +0, 10, 20, 100 y 200 µMol de TDZ ó BAP. Bulbitos: Se diseñó un ensayo de multibrotación con ruptura de dominancia apical repitiendo la relación de fitorreguladores reportada por Rodrigo (2008) para plántulas in vitro (5.3 μMol de ANA y 4.9 μMol de 2-iso-pentenil-adenina, 2iP) e incorporando 5.3 μMol de ANA en sus combinaciones posibles con 4.9 y 0.49 μMol de 2iP ó BAP. 5) Aclimatación: El material obtenido en condiciones in vitro fue transferido a macetas de 10 cm de diámetro con sustrato GrowgMix® de TerráFértil y con una cubierta plástica protectora que fue siendo perforada diariamente durante una semana hasta no registrarse signos de humedad (Maritano et al, 2010).