Inducción de callos y regeneración desde embriones cigóticos maduros de cebolla Valcatorce INTA

ROSSELLÓ, FERNANDO; MARINANGELI, PABLO; CURVETTO, NÉSTOR

Santa Rosa, La Pampa

Congreso; XXV Reunión Argentina de Fisiología Vegetal; 2004

Sociedad Argentina de Fisiología Vegetal

La etapa de inducción de callos y posteriormente la de regeneración son críticas en el proceso de transformación genética de cebolla a los fines de su mejoramiento. Se plantea la necesidad de establecer cual o cuales de los medios basales y reguladores de crecimiento recomendados cumplen eficientemente con aquellos procesos de diferenciación tisular para distintos explantos y genotipos. Así, es posible que diferencias cuali y cuantitativas de distintos nutrientes minerales, principalmente las formas de aporte de N y su balance (NO3-/NH4+), presentes en las formulaciones MS y BDS, en unión a un complemento de reguladores decrecimiento, i.e. 2,4-D y Picloram (Pic), puedan exhibir diferente performance en los procesos de inducción de callos y regeneración de plantas a partir de embriones cigóticos maduros (EM) en cebolla Valcatorce INTA (Vc). El objetivo del trabajo fue comparar los medios de cultivo BDS y MS, y dos reguladores de crecimiento, Picloram y 2,4-D, para la inducción de callos y regeneración de plantas desde EM de la cultivar local Vc.Se compararon dos medios de cultivo, BDS y MS, y dos reguladores de crecimiento, Pic y 2,4-D, a una concentración de 1 mg.L-1. El medio contenía además 0,1 mg.L-1 de bencilaminopurina (BAP), las vitaminas MS, 300 mg.L-1 de hidrolizado de caseína y 30 g.L-1 de sacarosa. Como explantos se utilizaron EM extraídos de semillas de cebolla Vc. Se realizaron repiques cada 30 días y luego de tres meses de cultivo en medio de inducción, los callos fueron repicados a medio de regeneración (MS con BAP 1 mg. L-1, 200 mg.L-1 de hidrolizado de caseína y 30 g.L-1 de sacarosa) donde permanecieron 60 días con un repique a los 30 días. La temperatura ambiente del cultivo fue 25± 3ºC. Los cultivos se mantuvieron en oscuridad continua durante la etapa de inducción de callos. Para la regeneración de plantas los cultivos se expusieron a un fotoperíodo de 16 horas. Todos los tratamientos indujeron callo, en porcentajes relativamente bajos (62,6% BDS+2,4-D, 41,1% BDS+Pic, 64,1% MS+2,4-D y 67,0% MS+Pic) si bien aceptables. Se encontraron diferencias de biomasa de callos en respuesta a ambos medios basales y a ambos reguladores de crecimiento (233,45 mg BDS+2,4-D, 480,52 mg BDS+Pic, 153,18 mg MS+2,4-D y 390,92 mg MS+Pic). Se obtuvieron plantas en todos los tratamientos excepto en MS+Pic, donde si bien se observaron zonas verdes no se regeneraron plantas. BDS+2,4-D produjo la mayor proporción de regeneración (23%), pero no se encontraron diferencias (P>0,05) entre los tratamientos BDS+2,4-D y MS+2,4-D en el número de plantas por callo regenerante (8,9 y 7.2, respectivamente). El bajo porcentaje de regeneración desde EM de cebolla Vc, confirma que la inducción de callos y regeneración es fuertemente dependiente de factores genéticos y fisiológicos./NH4+), presentes en las formulaciones MS y BDS, en unión a un complemento de reguladores decrecimiento, i.e. 2,4-D y Picloram (Pic), puedan exhibir diferente performance en los procesos de inducción de callos y regeneración de plantas a partir de embriones cigóticos maduros (EM) en cebolla Valcatorce INTA (Vc). El objetivo del trabajo fue comparar los medios de cultivo BDS y MS, y dos reguladores de crecimiento, Picloram y 2,4-D, para la inducción de callos y regeneración de plantas desde EM de la cultivar local Vc.Se compararon dos medios de cultivo, BDS y MS, y dos reguladores de crecimiento, Pic y 2,4-D, a una concentración de 1 mg.L-1. El medio contenía además 0,1 mg.L-1 de bencilaminopurina (BAP), las vitaminas MS, 300 mg.L-1 de hidrolizado de caseína y 30 g.L-1 de sacarosa. Como explantos se utilizaron EM extraídos de semillas de cebolla Vc. Se realizaron repiques cada 30 días y luego de tres meses de cultivo en medio de inducción, los callos fueron repicados a medio de regeneración (MS con BAP 1 mg. L-1, 200 mg.L-1 de hidrolizado de caseína y 30 g.L-1 de sacarosa) donde permanecieron 60 días con un repique a los 30 días. La temperatura ambiente del cultivo fue 25± 3ºC. Los cultivos se mantuvieron en oscuridad continua durante la etapa de inducción de callos. Para la regeneración de plantas los cultivos se expusieron a un fotoperíodo de 16 horas. Todos los tratamientos indujeron callo, en porcentajes relativamente bajos (62,6% BDS+2,4-D, 41,1% BDS+Pic, 64,1% MS+2,4-D y 67,0% MS+Pic) si bien aceptables. Se encontraron diferencias de biomasa de callos en respuesta a ambos medios basales y a ambos reguladores de crecimiento (233,45 mg BDS+2,4-D, 480,52 mg BDS+Pic, 153,18 mg MS+2,4-D y 390,92 mg MS+Pic). Se obtuvieron plantas en todos los tratamientos excepto en MS+Pic, donde si bien se observaron zonas verdes no se regeneraron plantas. BDS+2,4-D produjo la mayor proporción de regeneración (23%), pero no se encontraron diferencias (P>0,05) entre los tratamientos BDS+2,4-D y MS+2,4-D en el número de plantas por callo regenerante (8,9 y 7.2, respectivamente). El bajo porcentaje de regeneración desde EM de cebolla Vc, confirma que la inducción de callos y regeneración es fuertemente dependiente de factores genéticos y fisiológicos.