Producción heteróloga y caracterización de Serina proteasas de la mucosa epitelial de Pangasius hypophthalmus

AVILA RODRÍGUEZ, MARÍA ISABELA; MIRNA L SANCHEZ; BENAVIDES, JORGE

Jornada; Jornada de Investigadores en Formación UNQ; 2021

Universidad Nacional de Quilmes

Las proteasas son enzimas que participan en diversos procesos fisiológicos de manera transversal en los seres vivos1. Dada a su enantio-selectividad, rapidez de reacción y funcionamiento a temperatura ambiente, se han convertido en una alternativa más ecológica para procesos y productos de distintas industrias, entre ellas la de detergentes, cuero, alimentaria, farmacológica, y cosmética2,3. Tanto así que estas moléculas representan el 60% del mercado global de enzimas3, donde las serina proteasas encuentran una amplia aplicabilidad por su rol fundamental en diversos procesos celulares, como la hemostasis, fibrinolisis, señalización o formación de complemento, entre otros4. Sin embargo, el uso de proteasas en procesos industriales termina siendo costoso por su baja estabilidad a largo plazo, llevando a la innovación a procesos de inmovilización o búsqueda de nuevas variantes más resistentes en la naturaleza1,5. Dentro de las distintas fuentes animales, la mucosa de peces representa una interesante alternativa, ya que estos animales se encuentran constantemente expuestos a microflora patogénica y no patogénica en los ambientes acuáticos 6. Esto ha llevado a que su barrera primaria de defensa, la mucosa epitelial, sea una matriz rica en distintos elementos de defensa humoral, entre ellos las proteasas7. En el caso particular de la especie Pangasius hypophthalmus, nuestro grupo de investigación logró identificar la presencia de serina proteasas en el perfil protéico de la mucosa de este pez de alta relevancia comercial 9. Estas enzimas, al ser secretadas al medio, son potencialmente estabilizadas mediante glicosilación, haciéndolas excelente candidatas para evaluar su potencial uso industrial. Por ello, la presente investigación llevará a cabo la producción recombinante de serinas proteasas previamente identificadas en la mucosa epitelial de Pangasius hypophthalmus a través del sistema Pichia pastoris Glycoswith, para su posterior caracterización cinética, logrando así determinar su potencial rango de uso industrial.Referencias:1 Ward, OP. Comp.Biotechnol. 2011,604-615; 2 Sarrouh, B. et al J Boprocess Biotechniq. 2012, S4, 1-10 ; 3 Gurumallesh, P. et al. Int J Biol Macromol. 2019, 128, 254-267; 4 Déry, O. et al. Ame. J of Physiol. 1998, C1429-C1452; 5 Feijoo-Siota, L. & Villa, T. Food and Biopro Tech. 2010, 4, 1066-1088; 6 Nigam, AK. et al. Fish Physiol Biochem. 2012, 38, 1245-1256; 7 Esteban, MA.ISRN Immunol. 2012, 1-29; 8 Shental, D. & Yaakov, L. PNAS. 2008, 105-24, 8256-8261; 9Avila, MI. 2019, Characterization of serine-proteases from P. hypophthalmus epithelial mucus as a potential feedstock for biocosmetic applications, ITESM