Estudio del efecto del calcitrol sobre líneas celulares bovinas y biopelículas de Staphylococcus spp. aislados de vacas con mastitis

BOHL LP; TIRABOSCHI G; ISAAC P; BRESER ML; SODERO S; PORPORATTO C

Encuentro; IV Reunión conjunta de sociedades de Biología de la República Argentina; 2020

La mastitis bovina es la inflamación de la glándula mamaria, ocasionada principalmente por infecciones bacterianas. La formaciónde biopelículas (o biofilms) por los patógenos se considera actualmente un mecanismo de escape al reconocimiento por el sistemainmune del huésped y a la acción de los antimicrobianos. Considerando las acciones de la vitamina D en el sistema inmune, elobjetivo de este trabajo fue estudiar los efectos del calcitriol (o 1,25(OH)2D3, forma activa de la vitamina D) sobre Staphylococcusspp. formadores de biofilm aislados de vacas con mastitis y su mecanismo de acción. Hipotetizamos que tratamientos con1,25(OH)2D3 estimulan la producción de péptidos antimicrobianos (PAs) en células bovinas y que éstos ejercen efecto antibiofilmsobre los patógenos de mastitis. Se trabajó con cepas bacterianas formadoras de biofilm aisladas de bovinos con mastitis: S. aureusV329, S. xylosus 4913, S. chromogenes 40 y S. haemolyticus 6. Se utilizaron las líneas celulares MAC-T, células epitelialesalveolares mamarias bovinas, y BoMac, derivada de macrófagos bovinos. La citotoxicidad del 1,25(OH)2D3 sobre las célulasbovinas se estudió mediante la técnica de MTT (25, 50, 100 y 200 nM, 24 y 72 hs de tratamiento). La erradicación de biopelículaspre-formadas por la vitamina D se estudió mediante tinción con cristal violeta en las cepas seleccionadas (25, 50, 100 y 200 nM,24 hs de tratamiento). La erradicación de biofilms también se evaluó luego de su incubación con medio condicionado (MC)procedente de células bovinas tratadas con 1,25(OH)2D3 (25, 50 y 100 nM, 24 hs). La expresión génica relativa de los PAs Lingual(LAP), Traqueal (TAP) y Catelicidina 5 (CATHL5 o BMAP-28) se estudió en células MAC-T tratadas con calcitriol (50 ó 100nM, 24 hs) mediante transcripción reversa seguida de PCR en tiempo real. El análisis de los datos se realizó medianteANOVA/Bonferroni (diferencias significativas p