Estudio del rol de las células epiteliales mamarias bovinas en lainducción de la respuesta inmune innata contra Staphylococcus aureus planctónico o biofilm

BOHL LP; BOSCO C; ISAAC P; BRESER ML; CONESA A; ORELLANO MS; CORREA SG; TOLOSA DE TALAMONI N; PORPORATTO C

Jornada; Jornadas AAIV 2019; 2019

La mastitis bovina es una infección de la glándula mamaria que provoca su inflamación.Bacterias u otros microorganismos (hongos y virus) son las causas principales de mastitis. El modo de crecimiento bacteriano en biopelículas -o biofilm- ha cambiado la forma en que se estudian las interacciones entre los patógenos y las células huésped en el laboratorio. La formación de biofilm se considera una ventaja selectiva para los patógenos y ha sido asociada a la persistencia bacteriana en la ubre, la recurrencia de la enfermedad, el aumento de la resistencia a los antimicrobianos y la evasión a la respuesta inmune del huésped. Adicionalmente, se ha propuesto que las células epiteliales mamarias son actores principales en el inicio de la respuesta inmune innata, sin embargo, pocos estudios han abordado el papel de estas células en la inmunidad de la glándula mamaria contra patógenos de mastitis bovina formadores de biofilm. Por ello, el objetivo de este trabajo fue estudiar la respuesta inmune innata in vitro de células epiteliales mamarias bovinas infectadas con Staphylococcus aureus en modos de vida libre (planctónico) y en biofilm. Se utilizó la cepa formadora de biofilm S. aureus V329 (aislada de mastitis subclínica), una mutante biofilm negativa (S. aureus V329 ΔbapΔica) y la línea celular MAC-T (epiteliales de glándula mamaria bovina). En primer lugar se estudió la invasión bacteriana mediante el ensayo de exclusión con gentamicina, implementando tres metodologías experimentales que difieren en el modo de representar las biopelículas. Luego, se eligió una de las metodologías para estudiar: 1- la viabilidad celular utilizando la técnica de exclusión de azul de tripán,2- la expresión del receptor de reconocimiento tipo Toll (TLR) 2 por citometría de flujo, 3- la producción de citoquinas IL1β e IL6 mediante ELISA y 4- la expresión génica de IL8 y TNFα por retrotranscripción seguida de reacción en cadena de la polimerasa en tiempo real. El análisis estadístico de los datos se realizó con test t, ANOVA/Bonferroni o Kruskal Wallis según corresponda (*p