Análisis de la familia CDPK en plantas de papa

FANTINO, ELISA; SANTIN, FRANCO; ULLOA, RITA M

Mar del Plata

Congreso; RAFV 2012; 2012

Sociedad Argentina de Fisiología Vegetal

En plantas, el calcio modula numerosas vías metabólicas en respuesta a señales externas. Las quinasas de proteínas dependientes de calcio (CDPKs) son sensores/transductores del catión que se inducen/activan en respuesta a factores bióticos y abióticos. Componen familias multigénicas de aproximadamente 30 miembros. En Solanum tuberosum se han caracterizaron cinco isoformas, StCDPK1, 2 y 3 (Raíces et al, 2001; Giammaria et al., 2011; Gargantini et al., 2009) y StCDPK4 y 5 (Kobayashi et al., 2007). Mediante un análisis in silico, se identificaron 19 nuevas isoformas de CDPK en el genoma de Solanum phureja, no caracterizadas hasta el momento. Se diseñaron oligonucleótidos específicos sobre el extremo N-terminal variable (NTV) de cada isoforma para analizar la expresión de las mismas por RT-PCR semicuantitativa. Se confirmó el tamaño de los amplicones esperados usando como templado ADN genómico de S.t. L var. Spunta y var. Desirée y de la subespecie S.t. andigena. Un estudio de las secuencias aminoacídicas de las nuevas isoformas reveló que 3 de ellas presentan el consenso (MGXXXT/S) de miristoilación en el N-terminal y una cisteína en posición 3, 4 o 5 sujeta a palmitoilación, modificaciones involucradas en su asociación a membrana. El alineamiento de las secuencias codificantes, por ClustalW, junto a secuencias de CDPKs de Arabidopsis thaliana y Oryza sativa, posterior construcción de arboles de distancia por el método Neighbor Joining (NJ), utilizando el programa MEGA5, muestran como resultado el agrupamiento de las isoformas de StCDPKs dentro de los conjuntos determinados previamente para AtCPKs y OsCDPKs. Se detectó actividad de quinasa dependiente de calcio en diferentes extractos solubles y particulados de tejidos (hojas, tallos, pecíolos y raíces) de plantas de invernadero. Se analizó expresión de las isoformas usando como templado bibliotecas de expresión de hoja y estolón y DNAc sintetizado a partir de RNA total de hojas. Casi todas las isoformas están presentes en ambos tejidos con intensidad variable y solamente una de ellas se expresa exclusivamente en estolón. Usando la aplicación XX del potato genome browser se observó que los datos de expresión condicen con lo observado.