Selección y mejoramiento de un medio de cultivo para obtener una mayor biomasa activa de la cepa nativa Bacillus thuringiensis INTA Mo4-4

PÉREZ, M.; SAUKA, D.; ONCO, M.; BENINTENDE, G.

Mar del Plata

Congreso; IV Congreso Argentino de Microbiología Agrícola y Ambiental y I Jornada de Microbiología General; 2018

Asociacion Argentina de Microbiologia

Bacillus thuringiensis se caracteriza por producir cristales proteicos durantela esporulación, responsables de la toxicidad para larvas de insectos. Tantosus cristales como esporas se formulan juntos para constituir bioinsecticidasbacterianos. Recientemente, la cepa nativa INTA Mo4-4 fue seleccionada por sualta virulencia como candidata para la elaboración de un bioinsecticidadestinado al manejo de Alphitobiusdiaperinus (Coleoptera: Tenebrionidae). Por ello, se requiere de un medio de cultivo apropiadopara su producción, en el que se produzcan grandes cantidades de cristales quesean capaces de generar valores de toxicidad del nivel requerido. Se planteó eneste trabajo la selección y mejoramiento de un medio de cultivo líquido para laproducción de INTA Mo4-4, con el objetivo de lograr mayor biomasa activa,tomando como parámetro de selección la mayor concentración de proteínasproducidas. Se evaluaron cuatro medios de esporulación distintos, de los cualesse seleccionó el caldo BM como medio propicio para la producción. En él selogró una esporulación superior al 99% y una mayor producción de proteínastotales cuantificadas por Bradford (242,8 µg/ml), luego de 96 h de incubación a 28ºC en agitación. Posteriormente,se empleó el diseño dePlackett-Burman para determinar cuáles de los componentes del caldo BM afectabansignificativamente la producción de proteínas de la biomasa activa. El análisisestadístico reveló que el extracto de levadura era el único componente con unefecto positivo y significativo sobre la producción de proteínas (E=7,19; p = 0,006). La glucosa y el almidóndemostraron un efecto negativo y positivo respectivamente, aunque nosignificativo. Sabiendo que las proporciones deC:N en los medios de cultivo son importantes para el crecimiento normal de B. thuringiensis y la producción deproteínas insecticidas, y considerando que el análisis de Plackett-Burman sólodetecta efectos principales, resultó de interés avanzar en el estudio de lainteracción entre el extracto de levadura y el almidón soluble. Los doscomponentes seleccionados fueron optimizados utilizando un diseño centralcompuesto rotatorio, mediante el cual se determinó los valores óptimos deextracto de levadura y almidón soluble en 6,0 y 2,8 g/l respectivamente. Deesta manera se logró duplicar la producción de proteínas con respecto al mediobasal, lo que a su vez se tradujo en un aumento significativo de la toxicidadfrente a A. diaperinus.