Aislamiento y caracterización de una cepa entomopatógena de Photorhabdus luminescens obtenida a partir de una población nativa de Heterorhabditis bacteriophora (Nematoda)

ELICECHE, D.; PALMA, L.; FERRARI, E.; LÓPEZ, N.; ACHINELLY, F.; BELAICH, M.; GHIRINGHELLI, D.; BENINTENDE, G.; SAUKA, D.

Mar del Plata

Congreso; IV Congreso Argentino de Microbiología Agrícola y Ambiental y I Jornada de Microbiología General; 2018

Asociacion Argentina de Microbiologia

El género Photorhabdus (Enterobacteriaceae) incluyebacterias gram-negativas móviles que mantienen una asociación simbiótica connematodos parásitos de insectos de la familia Heterorhabditidae. Una vez que eljuvenil infectivo del nematodo (JI) invade un insecto, las bacterias sonliberadas produciendo toxinas y metabolitos secundarios que pueden matar alhospedador por septicemia dentro de las 48 h. El objetivo de este trabajo fuecaracterizar un aislamiento de Photorhabdus spp. asociado a una poblaciónnativa de entomonematodos. La bacteria se aisló a partir del nematodoHeterorhabditis bacteriophora cepa SP, obtenido de muestras de suelo colectadasen una huerta hortícola de La Plata (Buenos Aires). Larvas del coleópteroTenebrio molitor se utilizaron como hospedador cebo para la obtención de losnematodos a partir de las muestras de suelo. Los cadáveres de los insectosinfectados (48 hs postmorten) se esterilizaron por inmersión en etanol 70% y sepunzaron con microjeringa por los intersegmentos para obtener la bacteria. Unagota de hemolinfa se sembró en medio NBTA y se mantuvieron a 29 ºC durante 48hs. La caracterización de la cepa se realizó por secuenciación de su ADNgenómico total (Illumina), análisis  de espectrofotometría de masas(MALDI-TOF), y pruebas bioquímicas API 20E, API20 NE y API 50CH. La patogeniafue evaluada en larvas de T. molitor por microinyección de bacterias en lahemolinfa. Para el ensamblado de las lecturas crudas de la secuenciación genómicase utilizó el software Geneius R10. Se generaron 334 contigs con un tamañototal de 5.294.507 bp y un porcentaje de G+C de 42,5%. La anotación genómica sellevó a cabo utilizando el servidor RAST obteniéndose 5.165 secuenciascodificantes (CDs), de los cuales 25, mostraron homología con genes de toxinasinsecticidas ya descritos y que serían los responsables de la actividadinsecticida de esta cepa contra T. molitor cuya mortalidad fue del 80%. Losresultados por MALDI-TOF (2.13) y el análisis de secuencia de los genes de 16s,gyrB, y glnA mostraron un 99,7 % de similitud con la cepa de referencia TTO1 P.luminescens subsp. laumondii. Sin embargo, presentó diferentes caracteresfenotípicos que nos hace pensar que esta cepa nativa de P. luminescens podría constituiruna nueva subespecie. Estudios fenotípicos y genotípicos complementarios podráno no confirmar esta hipótesis.