Desarrollo de estrategias para la detección e identificación de genes que codifican proteínas mosquitocidas Cyt de Bacillus thuringiensis

SAUKA, D. H.; MONELLA, R. H.; BENINTENDE, G. B.

Bento Gonçalves, Brasil

Simposio; XI Simpósio de Controle Biológico; 2009

Las toxinas mosquitocidas de Bacillus thuringiensis pertenecen a 2 familias que son estructuralmente diferentes: las proteínas Cry y las Cyt. Estas últimas se clasifican de acuerdo a la similitud de sus secuencias en los grupos Cyt1 y Cyt2, los que a su vez se encuentran integrados por diversas clases y subclases. La importancia de su estudio radica en que éstas podrían ser útiles como herramientas para combatir la resistencia y para aumentar la actividad tóxica de algunos insecticidas microbianos. Teniendo en cuenta dicho planteo, surgió la necesidad de disponer de estrategias que en una primera instancia sean útiles para detectar e identificar estos genes en B. thuringiensis y que posteriormente permitan el descubrimiento de nuevas variantes de los ya conocidos. Se optó entonces por el desarrollo de 2 estrategias basadas en amplificación génica (PCR) y posterior análisis de restricción (RFLP) para detectar e identificar todos los genes cyt1 y cyt2 reportados hasta ahora. Se analizaron 90 cepas de B. thuringiensis provenientes de colecciones internacionales que pertenecen a la colección del IMYZA-INTA. Según lo esperado, la combinación de genes cyt1Aa y cyt2Ba se identificó en 5 cepas del svar israelensis y el gen cyt2Aa en 1 del svar kyushuensis. En las cepas analizadas no se encontraron genes cyt1Ab, cyt1Ba, cyt1Ca, cyt2Bb, cyt2Bc ni cyt2Ca. Los resultados obtenidos nos infieren la utilidad de estas estrategias para la detección e identificación de genes cyt en B. thuringiensis y abre un camino hacia su empleo en estudios de tamizaje de colecciones de aislamientos nativos como fuentes de potencial genético.