Toxicidad de Bacillus thuringiensis INTA Mo4-4 para Alphitobius diaperinus. Efecto de la solubilización y proteólisis in vitro de sus cristales sobre la actividad tóxica

PÉREZ, M.; SAUKA, D.; ONCO, M.; BENINTENDE, G.

Rosario

Congreso; XXIII Congreso Latinoamericano de Microbiología y XIV Congreso Argentino de Microbiología; 2016

AAM

Uno de los problemas que afecta a las explotaciones avícolas es la presencia de Alphitobius diaperinus (Coleoptera: Tenebrionidae), capaz de causar efectos traumáticos en las aves, transmitirles enfermedades y producir daños físicos en las instalaciones. Una estrategia complementaria o alternativa al control químico habitual de esta plaga podría incluir la aplicación de bioinsecticidas que posean Bacillus thuringiensis como ingrediente activo. Esta bacteria produce cristales paraesporales de naturaleza proteica que son los principales responsables de la toxicidad para insectos a través de un proceso de ingestión. La solubilización de los cristales en la alcalinidad del intestino medio de insectos susceptibles y su posterior procesamiento enzimático son claves en el mecanismo de acción. Para ciertos coleópteros, se ha reportado que la toxicidad puede verse afectada por una baja alcalinidad de sus intestinos medios cuando se la compara con la de otros insectos. Esto generaría una pobre solubilización de los cristales que impediría la consiguiente activación de la toxina. El objetivo de este trabajo fue cuantificar la toxicidad de la cepa nativa B. thuringiensis INTA Mo4-4 para A. diaperinus, seleccionada en ensayos preliminares por la alta mortandad producida. Se planteó además comparar dicha toxicidad con aquellas de bioensayos con biomasa solubilizada y digerida enzimáticamente in vitro. INTA Mo4-4 fue cultivada en caldo BM hasta autolisis en agitación a 29ºC. La biomasa fue obtenida por centrifugación del cultivo completo, secada, molida y conservada a -20ºC hasta su uso. Una parte fue solubilizada en Na2CO3 50 mM pH 10,5 (BS), y otra también solubilizada para luego ser digerida con tripsina (BD). Se realizaron bioensayos mediante el método de incorporación en dieta usando placas de 24 pocillos (Nunc 143982). Se evaluaron seis concentraciones distintas, más una con agua destilada como control. Las diferentes preparaciones de biomasa fueron vertidas en cada pocillo a una concentración final de entre 35 y 320 g/ml (factor de dilución=0,65). Una larva de 2º estadio fue agregada por pocillo. Cuarenta y ocho larvas se pusieron a prueba por dilución. Tres replicas fueron ensayadas en días diferentes para cada tratamiento. La mortalidad se registró luego de 15 días a 29ºC. Posteriormente, ejecutado el análisis Probit, se estimó una concentración letal media (CL50) de 137 [113-171] g/ml para INTA Mo4-4. Esta fue comparada (ANOVA) con la CL50 de la BS (158 [118-251] g/ml) y la BD (165 [125-246] g/ml). El análisis estadístico no mostró diferencias significativas entre los tratamientos. Este estudio permitió estimar el potencial toxicológico de INTA Mo4-4 como base de un nuevo bioinsecticida para el control de A. diaperinus. Asimismo, las observaciones obtenidas sugerirían que las condiciones intestinales naturales de A. diaperinus serían adecuadas para el normal procesamiento de los cristales de INTA Mo4-4.