Determinación de caracteres fenotípicos y genotípicos de aislamientos nativos de Bacillus thuringiensis obtenidos de suelos de distintas regiones ecológicas

SAUKA, D., ALFONSO, D., LOPEZ, N., PÉREZ, M., ONCO, M., BENINTENDE, G.

Buenos Aires

Congreso; III Congreso Argentino de Microbiología Agrícola y Ambiental; 2015

Asociación Argentina de Microbiología

Bacillusthuringiensises uno de los microorganismos más comúnmente empleados en el control microbianode plagas. Esta bacteria se destaca por sintetizar inclusiones parasporales denaturaleza proteica durante la esporulación, que son responsables de actividadinsecticida para distintos órdenes de insectos. En los últimos años, se hanestablecido colecciones de B.thuringiensis alrededor de todo el mundo con la finalidad de encontrarcepas productoras de factores de virulencia que posean mayor poder insecticidao tóxicas para insectos en los que no se haya reportado actividad. En nuestrolaboratorio hemos constituido y tipificado, de acuerdo a nuestro conocimiento,la colección más amplia de B.thuringiensis nativos y exóticos de Argentina. En este trabajo se planteadisponer de aislamientos de B.thuringiensis caracterizados genotípica y fenotípicamente que enriquezcandicha colección, fuente de recursos genéticos para el desarrollo de nuevas de herramientasde protección biológica. Se analizaron 17 muestras de suelo de distintasregiones ecológicas de nuestro país. Se obtuvieron 16 aislamientos que fueronidentificados por la presencia de cristales parasporales. Se visualizaroncristales amorfos y ovoides mediante microscopía de contraste de fases. Seanalizó el contenido proteico de los mismos mediante electroforesis en geles deSDS-PAGE. La mayoría de los aislamientos presentaron una banda de ca 65 kDa, mientras que otros bandas de ca 100 kDa o mayores. Ninguno presentóun perfil idéntico al de las cepas de referencia. Luego se procedió a ladetección del gen thuE asociado a lasíntesis de b-exotoxina, y degenes que codifican proteínas tóxicas para insectos del orden Lepidoptera (cry1, cry2 y vip3A), Coleoptera(cry3, cry7, cry8, cry23 y cry37) y Diptera (cry4, cry11, cyt1 y cyt2) mediante amplificacióngénica (PCR) y variantes. Se obtuvo ausencia de amplificaciones para los genesestudiados en los 16 aislamientos. Se confirmó la ausencia de producción de b-exotoxina empleandobioensayos con Musca domestica.Finalmente, se analizaron los 16 aislamientos mediante Rep-PCR y se establecieronrelaciones de parentesco a través de los perfiles electroforéticos logrados. Segeneraron 14 perfiles electroforéticos distintivos, a partir de los cuales seevidenciaron 19 bandas polimórficas comprendidas entre  0,5 y  3,0 kb. Ninguno de estos fueidéntico al de alguna de las cepas de referencia. Todo esto sugiere unavariabilidad genética alta entre ellos. Se observó además que, por lo general,aislamientos obtenidos de suelos de distintos lugares no muestran tendencia aagruparse según su procedencia geográfica. En conclusión, los aislamientosobtenidos e incorporados a nuestra colección, resultaron ser muy diferentesunos de otros. Estos constituyen una fuente importante de diversidad genética ya pesar de no portar genes productores de los metabolitos tóxicos másdifundidos responsables del biocontrol de insectos hospedantes conocidos,podrían ser portadores de genes codificadores de factores nuevos de toxicidad.