Caracterización de Bacillus thuringiensis INTA Mo4-4 tóxico para el escarabajo de la cama de pollo

P¨¦REZ, M.; SAUKA, D.; ONCO, M.; BENINTENDE, G.

Buenos Aires

Congreso; III Congreso Argentino de Microbiolog¨ªa Agr¨ªcola y Ambiental; 2015

Asociaci¨®n Argentina de Microbiolog¨ªa

Bacillusthuringiensis es una bacteria entomopatógena que se utilizacomo ingrediente activo de formulaciones de pesticidas biológicos. Se caracteriza por producir durante la esporulación inclusiones cristalinas que contienen las proteínas Cry tóxicas para diferentes insectos. Además puede secretar otros factores de virulencia durante la fase vegetativa como la b-exotoxina, un metabolito termoestable e inespecífico. Los cristales ingeridos por larvas de insectos susceptibles son solubilizados al llegar al intestino medio encondiciones alcalinas y procesados enzimáticamente generando las toxinas activas. Estas se unen a receptores específicos y forman poros en la membrana de las células epiteliales desencadenando un proceso que lleva al insecto a la muerte. En este trabajo se determinan los caracteres fenotípicos y genotípicos principales de B. thuringiensis INTAMo4-4, un aislamiento nativo con toxicidad para el escarabajo de la cama de pollo Alphitobius diaperinus (Coleoptera). La presencia de cristales se evidenció en un microscopio de contraste de fases y sus componentes proteicos analizados a través de SDS-PAGE. Se evaluó la capacidad de solubilización de los mismos in vitro empleando distintas soluciones tamponadas (NaBr 3,3 M pH 6,6; Na2CO350 mM pH 10,5; NaOH 0,1 M pH 12,9) para luego ser digeridos con tripsina. Se empleó PCR para detectar genes insecticidas (cry3, cry7, cry8, cry23 ycry37) y un gen asociado a la síntesis de b-exotoxina de tipo I (thuE). Para confirmar la producción de b-exotoxina se realizaron bioensayos con larvas de Musca domestica. Se establecieron relaciones de parentesco con cepas de referencia a través de REP-PCR. Los resultados mostraron la presencia decristales cuadrados aplanados que se asociaron a un perfil proteico de ca. 72 kDa, similar al de la cepa DSM2803 perteneciente al serovar tenebrionis. Mediante SDS-PAGE se observó también que los cristales se solubilizaron en todas las condiciones, siendo el Na2CO3 el más eficiente. La tripsinización de las proteínas solubilizadas mostró un péptido resistente a la proteasa de ca. 60 kDa similar al de la mayoría de las proteínas Cry. INTA Mo4-4 presentó los genes cry3, cry23 y cry37 y la ausencia de b-exotoxina al igual que DSM2803. Sin embargo, esta cepa fue previamente ensayada con A. diaperinus resultando significativamente menos tóxica que INTA Mo4-4. Otra diferencia fue su perfil electroforético de REP-PCR. Estos resultados nos permitieron conocer caracteres fenotípicos y genotípicos importantes de INTA Mo4-4 y sus diferencias con cepas similares. Este conocimiento es indispensable en microorganismos con potencial para el desarrollo de nuevos bioinsecticidas.