Larvas de Cydia pomonella como fuente de aislamiento de Bacillus thuringiensis

ONCO, M.; SAUKA, D.; PÉREZ, M.; BENINTENDE, G.

Buenos Aires

Congreso; III Congreso Argentino de Microbiología Agrícola y Ambiental; 2015

Asociación Argentina de Microbiología

Bacillus thuringiensis es el microorganismo entomopatógeno más estudiado yutilizado como agente de control microbiano deinsectos plaga. Esta bacteriase caracteriza porsintetizar factores de virulencia quese conglomeran en inclusiones cristalinas parasporales (proteínas Cry) durante laesporulación. Además, puede secretar metabolitos ?insecticidas? al mediodurante su fase vegetativa que son activos perse o que pueden contribuir sinérgicamente a la toxicidad global de la cepa.Se ha aislado a partir de suelos, filoplano de plantas, residuos de la moliendade granos y larvas de insectos enfermos o muertos alrededor de todo el mundo. Unaestrategia común de aislamiento incluye muestrear zonas donde conviven los insectosy el cultivo afectado con el objeto de obtener B. thuringiensis tóxicos para la plaga. En el presente estudio sedescribe el aislamiento y caracterización de B.thuringiensis, obtenidosde larvas vivas y sanas de Cydia pomonella(Lepidoptera: Tortricidae). Se analizaron18 larvas provenientes de distintas fincas libres de la aplicación de B. thuringiensis radicadas en Tunuyán,Mendoza. A partir de tres de ellas, se obtuvieron 8 aislamientos que fueronidentificados por la presencia de cristales parasporales y análisis de unfragmento del gen 16S rRNA. Se individualizaron cristales ovoides mediantemicroscopía de contraste de fases en todos ellos. Su análisis mediante SDS-PAGEbrindó la existencia de una banda principal de ca. 130 kDa en la mayoría de los mismos, mientras que en otros de ca. 180 kDa. Posteriormente se procedióa la detección de genes que codifican proteínas tóxicas para lepidópteros, coleópterosy dípteros, y de genes asociados a la síntesis de b-exotoxina y zwittermicina, mediante amplificacióngénica (PCR). Se obtuvo ausencia de amplificaciones para los genes estudiadosen todos los aislamientos. Paralelamente se analizaron mediante Rep-PCR. Estopermitió que los aislamientos se agruparan dentro de uno de dos perfileselectroforéticos distintivos. Se evidenciaron en ellos 19 bandas polimórficas. Elperfil de uno de estos grupos se asemejó al de la cepa coleoptericida DSM2803utilizada como referencia. Finalmente se evaluó la toxicidad de losaislamientos para larvas neonatas de C.pomonella. Ninguno resultó tóxico. Para concluir, es factible aislar B. thuringiensis de larvas vivas y sanasde C. pomonella que, como sepresumía, no fueron tóxicas para este insecto. Se podría hipotetizar que estasse encontraban en las larvas de donde se aislaron como saprófitos y llegaron aellas por estar en contacto con esporas libres de B. thuringiensis o contenidas en su alimento habitual. Losresultados obtenidos sugieren en general una gran variabilidad entre los dos gruposde aislamientos obtenidos. Algunos podrían ser productores de proteínasinsecticidas diferentes a las conocidas y/o con un espectro de acción extendidoa otros órdenes de insectos distintos a los estudiados, o ser simplemente notóxicas.