CONICET | Buscador de Institutos y Recursos Humanos

Bacillus thuringiensis es la bacteria entomopatógena más utilizada como agente de control biológico a nivel mundial. Tiene la propiedad de producir durante la esporulación inclusiones que contienen proteínas Cry con actividad tóxica de gran especificidad en determinados insectos. Algunas cepas pueden producir durante el crecimiento vegetativo otros factores de virulencia también específicos como es el caso de las proteínas Vip y Sip, y otros altamente inespecíficos como la thuringiensina, que es tóxica incluso para células de mamíferos. Una plaga principal en las regiones algodoneras de Latinoamérica es el picudo Anthonomus grandis (Coleoptera: Curculionidae), tanto por los daños que causa como por las dificultades que representa su control. De estudios previos se seleccionaron cuatro cepas nativas de B. thuringiensis por tener la mayor tasa de mortalidad para el picudo. Se observó que la fracción activa de estas cepas correspondía al sobrenadante, por lo que podría asociarse a la acción de thuringiensina o también a proteínas que secretan al medio como la Cry1Ia. El objetivo de este trabajo fue brindar nuevos caracteres fenotípicos y genotípicos de estas cepas nativas de Bacillus thuringiensis. Otras dos cepas nativas de menor toxicidad no productoras de thuringiensina y otras tres exóticas fueron también incluidas en este estudio. La presencia de cristales se evidenció en un microscopio de contraste de fases y sus componentes proteicos analizados mediante electroforesis en geles de poliacrilamida (SDS-PAGE). Una PCR basada en secuencias palindrómicas extragénicas repetidas (REP) se usó para conocer la diversidad y relación entre ellas. A su vez se obtuvo ADN plasmídico mediante lisis alcalina y extracciones de fenol:cloroformo:alcohol isoamílico. Los patrones de plásmidos se obtuvieron mediante electroforesis en geles de agarosa 0,6%. Se identificó en todas las cepas nativas la presencia de cristales bipiramidales y cúbicos. Todas presentaron un perfil proteico similar entre ellas (130 y 65 kDa), y al de la cepa HD-1 del serovar kurstaki. También presentaron un perfil electroforético de REP-PCR idéntico al de HD-1, sugiriendo su posible clasificación dentro del mencionado serovar. Algunas diferencias empezaron a aparecer entre las cepas nativas cuando se analizaron sus patrones plasmídicos. Las cuatro cepas nativas productoras de thuringiensina presentaron perfiles muy similares, pero distintos al del resto de las cepas analizadas. Estas últimas comparten una banda de ca. 7900 pb con la cepa productora de thuringiensina HD-2, ausente en aquellas no productoras de dicho metabolito. Los resultados señalan que las cuatro cepas nativas que habían producido una alta tasa de mortalidad para el picudo, comparten gran similitud con la cepa exótica HD-1, difiriendo radicalmente en la producción de thuringiensina. La banda correspondiente a un plásmido que comparten con HD-2, podría contener el cluster de genes codificantes de la misma.

enviar mensaje