INVESTIGADORES
SAUKA Diego Herman
congresos y reuniones científicas
Título:
Prospeccion de genes insecticidas de Bacillus thuringiensis empleando muestras agrupadas de DNA
Autor/es:
SAUKA D; LOPEZ N; ONCO M; PEREZ M; BERRETTA M; BENINTENDE G.
Lugar:
Buenos Aires
Reunión:
Congreso; XIII Congreso Argentino de Microbiologia. II Congreso de Microbiologia Agricola y Ambiental (DiMAyA); 2013
Institución organizadora:
Asociación Argentina de Microbiologia
Resumen:
Bacillus thuringiensis es una bacteria entomopatógena que se utiliza ampliamente
como ingrediente activo de insecticidas biológicos. Su toxicidad para insectos
está relacionada principalmente con la presencia de cristales proteicos que se
hallan constituidos por una o más proteínas Cry. B. thuringiensis puede producir también otros factores de
virulencia que secreta al medio, entre los que se destacan las denominadas
proteínas Vip. Estas proteínas se clasifican en grupos definidos en base a la
similitud de secuencia y cada grupo presenta un espectro de acción particular
con respecto a los órdenes de insectos susceptibles. Por lo tanto, conocer el
perfil de genes insecticidas que una cepa porta, permite predecir el espectro
de actividad de la misma. Debido a que existe una gran diversidad de genes
insecticidas descritos actualmente con especificidad para un determinado orden
de insectos, y a que en general su detección se realiza en colecciones que
constan de numerosas entradas, un estudio de tamizaje para detectar por PCR
genes insecticidas específicos se hace realmente engorroso. Teniendo en cuenta
estas observaciones, se evaluó la eficiencia de la amplificación génica de
muestras agrupadas de DNA total de B.
thuringiensis en la prospección de genes que codifican proteínas tóxicas
para coleópteros. Se emplearon distintos protocolos de PCR para detectar los genes
cry3, cry7, cry8, vip1 y vip2 con cebadores específicos diseñados en el laboratorio. Los productos
de amplificación esperados son de alrededor de 820 pb para cry3, 434 pb para cry7,
930 pb para cry8, 530 pb para vip1 y 826 pb para vip2. Se formaron los siguientes pooles de muestras de DNA
obtenidas por hervor directo de colonias: (pool A) DNA de 4 B. thuringiensis sin gen de interés +
DNA de B. thuringiensis portador del
gen de interés; (pool B) DNA de 9 B.
thuringiensis sin gen de interés + DNA de B. thuringiensis portador del gen de interes. En la deteccion de
cada gen en particular se empleo una alícuota de estos pooles, DNA de B. thuringiensis portador del gen de
interes como control positivo y agua de reaccion como negativo. Lo productos de
amplificación se analizaron mediante electroforesis en geles de agarosa y
posterior tinción en solucion de bromuro de etidio. Se logro mantener la
sensibilidad de las reacciones utilizando pooles de 5 y 10 muestras conteniendo
cada uno una sola que sea positiva. La amplificación génica de muestras
agrupadas de DNA de Bacillus
thuringiensis mejoró la eficiencia de detección de genes insecticidas. Esta
estrategia ofrece un ahorro de tiempo de trabajo y disminuiria el numero de
reacciones (disminución de costos) en los estudios de tamizaje, ya que solo las
muestras de los pooles positivos requieren ser analizadas individualmente.
