Caracterización molecular y farmacológica del receptor a histamina H3 en células tumorales mamarias humanas MCF-7.

BRENZONI PG; MARTINEL LAMAS D; MONDILLO C; MASSARI N; PIGNATARO O; RIVERA ES; MEDINA VA

Buenos Aires, Argentina

Jornada; XXVI Jornadas Multidisciplinarias de Oncología, Instituto de Oncología Angel H. Roffo; 2010

Instituto de Oncología Angel H. Roffo

El receptor a histamina H3 (RH3) se ha identificado inicialmente en el sistema nervioso central y periférico como un receptor presináptico, encontrándose acoplado a la proteína Gαi/0. Previamente demostramos la presencia de los RH3 no sólo en líneas celulares sino también, en lesiones benignas y malignas de la glándula mamaria humana, exhibiendo un papel crucial en la regulación de la proliferación y progresión del cáncer mamario. En el presente trabajo se realizó la caracterización farmacológica y molecular, como así también se investigó la acción de la histamina y ligandos del RH3 sobre la proliferación en la línea celular de cáncer mamario, MCF-7. Primeramente se investigó la expresión de los RH3 por RT-PCR, inmunofluorescencia y western blot con diversos anticuerpos específicos y también mediante ensayos de unión. Para evaluar la vía de transducción de señales asociada al RH3 en estas células, se evaluó la acumulación de AMPc mediante técnicas de radioinmunoanálisis. Por otra parte, se determinó la proliferación mediante el ensayo clonogénico, recuento celular e incorporación de bromodeoxiuridina (BrdU). Los resultados demuestran que las células MCF-7 expresan el RH3 tanto a nivel del ARNm como a nivel de la proteína, exhibiendo una Kd=3,3±0,6 nM e inmunoreactividad en la membrana plasmática y a nivel intracelular donde colocalizó con estructuras del Golgi. El análisis por western blot demostró que el tratamiento con ligandos del RH3 moduló la expresión de diferentes especies moleculares del RH3. Además, agonistas del RH3 no fueron capaces de revertir el aumento de AMPc producido por forskolina y disminuyeron la proliferación celular, aumentando el tiempo de duplicación de las células MCF-7 (63.1 h vs. 32.6 h en células no tratadas, P<0.01). Podemos concluir que las células MCF-7 exhiben una expresión funcional del RH3. El mismo no parece comportarse como un RH3 clásico y diferentes ligandos modulan la expresión de las diversas especies moleculares del RH3 lo que podría influenciar el perfil farmacológico y en consecuencia la eficacia terapéutica de los ligandos del RH3.