Papel de los recetores a histamina H3 y H4 en las respuestas biol¨®gicas mediadas por histamina en las c¨¦lulas de carcinoma mamario humano MCF-7.

P BRENZONI; D MARTINEL LAMAS; N MASSARI; C MONDILLO; O PIGNATARO; RM BERGOC; ES RIVERA; VA MEDINA

Mar del Plata, Buenos Aires, Argentina

Congreso; LIV Reuni¨®n Anual de la SAIC, Sociedad Argentina de Investigaci¨®n Cl¨ªnica; 2009

Sociedad Argentina de Investigaci¨®n Cl¨ªnica

La histamina es una amina biog¨¦nica que participa en la regulaci¨®n de la proliferaci¨®n y diferenciaci¨®n celular durante el desarrollo de la gl¨¢ndula mamaria. En el presente trabajo se investig¨® el papel de los receptores a histamina H3 (RH3) y H4 (RH4) en la regulaci¨®n de las respuestas biol¨®gicas mediada por histamina en la l¨ªnea celular de c¨¢ncer mamario, MCF-7. La expresi¨®n de los receptores se investig¨® por RT-PCR, inmunofluorescencia y ensayos de uni¨®n. La proliferaci¨®n se evalu¨® mediante el ensayo clonog¨¦nico, recuento celular e incorporaci¨®n de BrdU. La apoptosis se determin¨® mediante el ensayo de TUNEL, Anexina-V y el potencial de membrana mitocondrial con el colorante DiOC6. La senescencia se estudi¨® a trav¨¦s de la actividad de ¦Â-galactosidasa asociada a senescencia. Los resultados muestran que las c¨¦lulas MCF-7 expresan los RH3 (Kd=3,3¡À0,6 nM) y RH4. La histamina reduce la proliferaci¨®n de las c¨¦lulas MCF-7 en forma dosis dependiente a partir de una concentraci¨®n 1 nM, aumentando el tiempo de duplicaci¨®n de 31,3 h a 41,5 h. Mediante el uso de agonistas y antagonistas espec¨ªficos, determinamos que la histamina disminuye la proliferaci¨®n a trav¨¦s de los RH3 y RH4 (50% y 60% de inhibici¨®n, respectivamente). Este efecto inhibitorio sobre la proliferaci¨®n se asocia con la inducci¨®n de apoptosis observ¨¢ndose un aumento significativo del porcentaje de c¨¦lulas Anexina-V positivas (14.6¡À3.4 vs. 5.0¡À0.9, P<0.01), TUNEL-positivas (10.5¡À1.5 vs. 3.6¡À0.5, P<0.01) y una disminuci¨®n del potencial de membrana mitocondrial luego de 72 h de tratamiento. Adem¨¢s, el tratamiento con histamina incrementa el porcentaje de c¨¦lulas senescentes (14.4¡À0.4 vs. 7.8¡À0.5, P<0.01). Los resultados demuestran que los RH3 y RH4 son los principales receptores involucrados en la regulaci¨®n de la proliferaci¨®n, apoptosis y senescencia celular mediada por histamina en las c¨¦lulas MCF-7 siendo ¨¦stos, procesos claves en la carcinog¨¦nesis mamaria.