DETERMINANTES GENÉTICOS DE PATOGENICIDAD DEL VIRUS DE LA FIEBRE AFTOSA EN EL MODELO RATÓN ADULTO

CACCIABUE M.; CURRÁ, A.P.; CARRILLO, E.; RIEDER, E.; GARCÍA NÚÑEZ, M.S.; GISMONDI, M.I.

Buenos Aires

Congreso; XII Congreso Argentino de Virología; 2017

Sociedad Argentina de Virología

El modelo ratón adulto ha sido utilizado para el estudio de lapatogenicidad del virus de la fiebre aftosa (FMDV). Previamente hemosidentificado 2 variantes de FMDV A/Arg/01 con distinto grado depatogenicidad en ratones C57BL/6J/LAE: el virus A01L resulta letal en 24-48 h, en tanto el virus A01NL no causa la muerte en ninguna de las dosisevaluadas (103-106ufp/ratón). El análisis de las secuencias consensoentre ambos virus reveló 6 cambios no sinónimos: C2211T y T2515C(VP2), C3688T y A3775T (VP1) y A4579G y A5086G (2C), 23 cambiossinónimos y 2 cambios en la región no codificante del genoma viral.Nuestro objetivo fue evaluar el papel de los cambios no sinónimoshallados en VP1, VP2 y 2C como determinantes virales de lapatogenicidad de A01L. Mediante mutagénesis dirigida de un plásmidoque contiene el ADNc completo de A01NL (A01NLc), se construyeron losplásmidos mutantes p2211L, p2515L, p3688L, p3775L, pCapL (p2211-2515-3688-3775L), p2CL (p4579-5086L) y pA01L (p2211-2515-3688-3775L-4579-5086L), que incluyen las correspondientes sustituciones deA01L en el contexto genómico de A01NL. A partir de los plásmidoslinealizados se sintetizó el ARN viral in vitro y se transfectaron célulasBHK-21. Los virus infecciosos correspondientes se obtuvieron en elsobrenadante de transfección y fueron amplificados mediante 4 pasajesen células BHK-21. A fin de evaluar las características fenotípicas de losvirus mutantes se inocularon por vía intraperitoneal grupos de ratoneshembras de 9 semanas (n=4) con 105 ufp/ratón. A 22 horas postinfección(hpi) se tomaron muestras de sangre para la determinación del títuloviral; los animales se controlaron durante 7 días. Los ratones inoculadoscon los virus 2211Lc, 2515Lc, 3688Lc, 3775Lc y 2CLc presentaron signosleves de enfermedad a las 48-72 hpi, que revirtieron a partir de las 72hpi. Estos virus mostraron el mismo fenotipo que el virus A01NLc y queel virus parental A01NL. Por su parte, los ratones infectados con A01Lcmostraron signos severos de enfermedad (postura encorvada,incapacidad de responder a estímulos externos, espasmos regulares) omuerte a las 48 hpi, reproduciendo el fenotipo del virus parental A01L.Los ratones inoculados con CapLc presentaron signos intermedios deenfermedad a las 48 hpi (postura encorvada, baja actividad, espasmosregulares). En todos los grupos de ratones se evidenció replicación viral a las 22 hpi, siendo la viremia significativamente mayor en animalesinfectados con A01Lc (p