Diseño y evaluación de microARN artificiales para el silenciamiento del virus de la fiebre aftosa

CURRÁ AP; GISMONDI MI; ASURMENDI S; TABOGA OA

Buenos Aires

Congreso; XI Congreso Argentino de Virología y II Congreso Latinoamericano de Virología; 2015

Sociedad Argentina de Virología

La fiebre aftosa es una enfermedad viral altamente contagiosa que afecta animales biungulados y que causa grandes pérdidas económicas. El agente etiológico es el virus de la fiebre aftosa (VFA), un pequeño virus compuesto por una cápside icosaédrica que alberga una molécula única de ARN de cadena simple y polaridad positiva. Las vacunas actuales contra VFA están basadas en virus inactivado químicamente y son muy efectivas para el control y la erradicación de la enfermedad, aunque presentan el riesgo de incorrecta inactivación o escape desde las plantas productoras. Además, requieren al menos 7 días para conferir protección. Por lo tanto, resulta de interés desarrollar estrategias antivirales alternativas, entre las que se ha propuesto la tecnología de interferencia de ARN (ARNi). La ARNi es un proceso de silenciamiento génico postranscripcional en eucariotas, inducido por pequeñas moléculas de ARN complementarias al gen silenciado. Entre ellas se encuentran los microARN (miR), que están codificados en el genoma celular. El empleo de miR artificiales (amiR) diseñados para reconocer secuencias no endógenas constituye una herramienta segura y eficiente para el silenciamiento de ARN de interés. En el marco del desarrollo de una estrategia antiviral contra VFA mediada por amiR, en este trabajo se propuso la expresión constitutiva de amiR dirigidos contra la región 3D de VFA y su evaluación frente a la infección viral. Se determinó experimentalmente la estructura secundaria de la región 3D mediante hSHAPE y se realizó una predicción in silico utilizando el programa RNAxs para la selección de 7 secuencias blanco de amiR. Se construyeron vectores de expresión de amiR complementarios a cada una de esas regiones, que se utilizaron en experimentos de transfección transitoria y estable en células BHK-21 para evaluar su actividad de silenciamiento frente a la infección con VFA mediante la cuantificación del tamaño y el número de las placas de lisis. En 5 de 7 líneas celulares establemente transformadas, el diámetro de las placas de lisis obtenidas fue significativamente menor al observado en células control. Además, en 2 de 7 líneas celulares se observó una reducción del número de placas de lisis. Estos resultados sugieren que la región 3D es un blanco apropiado para el silenciamiento de VFA mediante amiR y que su expresión constitutiva en cultivos celulares afecta la replicación viral.