Compartimentación del virus de hepatitis C: análisis filogenético de la secuencia de las glucoproteínas de envoltura E1 y E2 completas de variantes aisladas de plasma y de células mononucleares de sangre periférica

DÍAZ CARRASCO JM; GISMONDI MI; TABOGA OA; VALVA P; GALOPPO MC; PRECIADO MV

Buenos Aires

Congreso; X Congreso Argentino de Virología; 2011

Sociedad Argentina de Virología

El virus de hepatitis C (HCV) contiene en su envoltura las glucoproteínas E1 y E2, que son esenciales para el reconocimiento y la entrada en las células diana. Aunque el principal sitio de replicación es el hígado, se ha demostrado que el HCV también presenta linfotropismo y se identificaron moléculas en células mononucleares de sangre periférica (CMSP) que tendrían una función similar a la de los receptores hepáticos. Sin embargo, aún no está claro qué factores determinan el tropismo de las diferentes variantes de HCV. En estudios previos de evolución y compartimentación de la región hipervariable 1 de E2 (HVR1) en niños con infección crónica por HCV hemos demostrado que las variantes virales aisladas de CMSP tienen secuencias diferentes a las detectadas en plasma y también existen variantes con tropismo dual, lo que sugiere un tropismo selectivo.Objetivo: Comparar la secuencia de las glucoproteínas E1 y E2 completas de variantes virales aisladas de plasma y de CMSP e identificar aminoácidos asociados con la compartimentación viral.Se analizaron 4 pares de muestras de plasma y CMSP correspondientes a tres pacientes pediátricos (A, B y C). Se separó el plasma y se aislaron las CMSP por centrifugación sobre Histopaque. Se extrajo el ARN total y se amplificó por RT-PCR anidada un fragmento de 1866 pb que abarca el extremo 3’ de la proteína core y las glucoproteínas E1 y E2 completas (cE1E2). Este es el primer estudio que analiza la secuencia de las glucoproteínas E1 y E2 completas en relación con el tropismo de HCV por CMSP. Para cada par de muestras plasma/CMSP, se clonó el fragmento cE1E2, se secuenciaron 10 clones de cada compartimento y se confeccionaron alineamientos de nucleótidos (nts) y de aminoácidos (aas). Se reconstruyeron las relaciones filogenéticas mediante los programas Modeltest, PAUP y MEGA, con el criterio de máxima verosimilitud. En los cuatro árboles filogenéticos se obtuvieron agrupamientos de clones provenientes de CMSP en linajes separados de los de plasma. En las muestras A1 y A2, los agrupamientos de CMSP incluyeron 10 y 7 clones respectivamente; mientras que, en las muestras B y C, los linajes de CMSP incluyeron 6 y 4 clones respectivamente. En todos los casos se encontró un clon derivado de plasma filogenéticamente muy relacionado con los linajes de CMSP, lo que sugiere la selección de ciertas variantes virales circulantes en plasma con tropismo particular por las CMSP. Además, para cada par de muestras plasma/CMSP, se determinaron las posiciones con distinta composición de aas entre los dos grupos de clones. En E1 se encontraron sólo 7 posiciones, 2 en el dominio transmembrana (TMD) y 5 a lo largo del ectodominio. En E2 se encontraron 33 posiciones, casi todas ellas en regiones de importancia: 13 en HVR1, 7 en HVR3, 5 en regiones de unión al receptor CD81, 3 en la región variable intergenotípica y 3 en el TMD.El hallazgo de variantes linfotrópicas filogenéticamente separadas y con ciertos aminoácidos diferentes de los encontrados en plasma asociados a regiones esenciales para la integridad estructural y funcional del heterodímero E1-E2, apoya la hipótesis de compartimentación viral.