Estudio de la variabilidad del virus de hepatitis C en una población de pacientes pediátricos.

GISMONDI MI; GRINSTEIN S; PRECIADO MV

Buenos Aires

Congreso; VII Congreso Argentino de Virología; 2002

Sociedad Argentina de Virología

El virus de la hepatitis C (HCV) es un ARN virus que produce principalmente infecciones crónicas que pueden progresar a cirrosis y hepatocarcinoma celular. La ARN polimerasa viral y los elevados niveles de replicación confieren al virus una alta tasa de mutaciones, tanto a nivel nucleotídico como en su secuencia de aminoácidos. Algunas regiones del genoma de HCV son altamente conservadas, mientras que otras presentan mayor variabilidad, relacionada con la aparición de variantes de escape a la presión selectiva generada por el hospedador. En pediatría, la infección por HCV es generalmente asintomática, y se la detecta en análisis de rutina o al estudiar pacientes con factores de riesgo de infección. Las principales vías de transmisión son la drogadicción endovenosa materna, la infección materna por HCV y la vía postranfusional. Existen también vías de transmisión desconocidas. El objetivo del presente trabajo es analizar la variabilidad de la región hipervariable 1 (HVR1) del gen de la proteína estructural 2 (E2) de HCV en muestras de pacientes pediátricos durante el período de seguimiento de su infección, y evaluar su relación con parámetros clínicos de la infección en dicha población. Se analizaron 20 muestras de plasma de 7 pacientes (rango de edad 3-16 años, mediana 11 años), obtenidas durante un período de seguimiento de la infección de entre 6 meses y 2 años. Se purificó el ARN total, se retrotranscribió y se amplificó por nested PCR un fragmento de 251 pb de la región 5´no codificante de HCV (5´NC). Se determinó el genotipo viral en cada muestra utilizando la técnica de RFLP. Se amplificó por nested PCR un fragmento de 348 pb de la región E1/E2 de HCV. Los productos de PCR se purificaron y se analizó su heterogeneidad por la técnica de SSCP. Dichos productos se secuenciaron en forma automática utilizando los primers sentido y antisentido. El análisis de las secuencias se realizó con los programas ClustalX y BioEdit. Los factores de riesgo asociados a la infección por HCV fueron: antecedentes de transfusiones de sangre o hemoderivados (3/7) e infección materna por HCV (2/7). En 2/7 casos no se encontraron factores de riesgo para la infección por HCV. Todos los pacientes presentaron carga viral para HCV detectable y 6/7 pacientes tenían transaminasas hepáticas elevadas durante el período de estudio. Ningún paciente estaba coinfectado con HIV. Todas las muestras estudiadas a lo largo del tiempo fueron positivas para HCV, determinado por PCR nested de la región 5´NC. En todos los casos, el genotipo viral fue el 1, siendo 5/7 subtipo a/c y 2/7 subtipo b. Las muestras de los 2 pacientes infectados por vía vertical conservaron el mismo patrón de SSCP a lo largo del tiempo (4 y 16 meses). En 5/7 pacientes se observaron diferencias en los patrones de SSCP en muestras consecutivas. La secuenciación de las mismas demostró la presencia de mutaciones sinónimas y no sinónimas en la región HVR1. En estos casos, la secuenciación directa no fue suficiente para determinar la secuencia exacta del fragmento amplificado por la posible existencia de cuasiespecies virales. Los valores de carga viral para HCV y de transaminasas no estuvieron relacionados con el grado de variabilidad de HVR1. La presencia de cuasiespecies de HCV en las muestras pudo deducirse a partir de patrones complejos de SSCP, que al ser secuenciados demostraron la presencia de secuencias múltiples en la misma muestra. La clonación y posterior secuenciación de los productos de PCR permitirá caracterizar mejor las cuasiespecies presentes en dichas muestras. La ausencia de variabilidad de HVR1 en los pacientes infectados por vía vertical estaría relacionada con un menor tiempo de evolución de la infección en dichos pacientes. El análisis de un mayor número de muestras nos permitirá estudiar el patrón de evolución de HCV en la infección pediátrica.