Dinámica evolutiva del virus de hepatitis C en niños: contribución de la compartimentación viral en células mononucleares de sangre periférica

GISMONDI MI; BECKER PD; DÍAZ CARRASCO JM; GUZMÁN CA; CAMPOS RH; PRECIADO MV

Buenos Aires, Argentina

Congreso; IX Congreso Argentino de Virología; 2008

Sociedad Argentina de Virología

El virus de hepatitis C (HCV) produce infecciones crónicas que pueden devenir en cirrosis y/o hepatocarcinoma. En niños, la infección crónica presenta características clínicas distintas que en adultos, sin progresión a cirrosis. El hígado es el principal sitio de replicación viral. Algunas variantes virales presentan tropismo por células mononucleares de sangre periférica (CMSP), que permitirían un bajo nivel de replicación. Este tropismo diferencial se vincula con la existencia de variantes con distintas secuencias primarias de las glucoproteínas de envoltura viral (E1-E2). Dentro de E2, la región hipervariable 1 (HVR1), sometida a presión selectiva por el sistema inmune, es útil para la descripción de la dinámica de cuasiespecies del HCV durante la infección crónica. El objetivo de este trabajo fue analizar la evolución de HVR1 en muestras de plasma (P) y estudiar la compartimentación viral en CMSP durante la infección crónica por HCV en niños.Se obtuvieron 17 muestras de sangre periférica de 4 casos HCV+. Se separó el P y se aislaron las CMSP. Se extrajo el ARN total de 17 muestras de P y de 12 muestras de CMSP y se amplificó por RT-PCR anidada un fragmento de 351 pb que contiene a HVR1. Los productos de amplificación se clonaron en un vector pCR2.1 (Invitrogen). Se secuenciaron 168 clones de plasma y 110 clones de CMSP. Para cada caso, se reconstruyeron las relaciones filogenéticas entre P y CMSP con las secuencias nucleotídicas (máx. verosimilitud) y se calculó la diversidad intra-muestra y entre muestras para P y CMSP (ClustalX, Modeltest, PAUP*). Se evaluó la evidencia de selección positiva con el cociente dN/dS (MEGA). Las secuencias de aminoácidos deducidas in silico se utilizaron para analizar la composición de aminoácidos de HVR1 y la complejidad de cuasiespecies (entropía de Shannon modificada). El análisis estadístico se realizó mediante test no paramétricos (GraphPad InStat).Se detectó ARN viral en todas las muestras de P y CMSP analizadas. En el caso 1 (niña de 13 años, HCV-1b) se evidenció un patrón temporal de evolución de HVR1 en P, con diversidad y complejidad de cuasiespecies crecientes durante 50 meses. Las variantes virales detectadas en CMSP reflejaron la dinámica evolutiva de HVR1 en P. El caso 2 (niña de 2 años, HCV-1a/c) mostró la coexistencia de poblaciones virales distintas que se alternaron en el P durante 38 meses, con complejidad de cuasiespecies creciente. Estas poblaciones virales se observaron también en CMSP, con menor complejidad, detectándose en algunos casos primero en éstas y luego en P. En el caso 3 (niño de 4 años, HCV-1a/c) se observó un patrón evolutivo “de a saltos” en las muestras de P, con disminución de la diversidad y complejidad de cuasiespecies durante 51 meses. Por el contrario, la complejidad se incrementó en CMSP. En el caso 4 (niño de 11 años, HCV-1a/c, tratamiento con interferón alfa durante 7 meses) se evidenció la existencia de al menos 2 grupos de variantes virales resistentes al tratamiento, con 2 patrones diferentes de evolución de HVR1. La complejidad de cuasiespecies en P se incrementó luego del tratamiento. En las CMSP se observó escasa diversidad y complejidad de cuasiespecies, con alternancia de linajes durante 41 meses de seguimiento. En los 4 casos se detectaron variantes de HVR1 con tropismo diferencial por P o por CMSP, y otras variantes con tropismo dual P-CMSP. En la mayoría de los casos, la diversidad y la complejidad de cuasiespecies resultaron menores en CMSP que en P. Los múltiples patrones de evolución de HVR1 observados reflejan distintos grados de interacción virus-hospedador durante la infección crónica en niños. La compartimentación del HCV en CMSP contribuye a la persistencia viral también en la infección pediátrica.