Dinámica poblacional y compartimentación durante la infección crónica por el virus de hepatitis C en pacientes pediátricos

DÍAZ CARRASCO JM; GISMONDI MI; VALVA P; PRECIADO MV

Encuentro; XXXII Reunión Científica Anual de la Sociedad Argentina de Virología; 2012

La dinámica de la infección por el virus de hepatitis C (HCV) adquirida durante la infancia es aún incierta y la enfermedad hepática muestra un curso más leve que en los adultos. Los hepatocitos son el principal sitio de replicación viral. Además, HCV presenta tropismo por otras células, entre ellas las mononucleares de sangre periférica (CMSP). La evolución intrapaciente está sujeta a la interrelación entre la respuesta inmune del huésped y la variabilidad del virus. Las CMSP jugarían un papel importante como reservorio viral y contribuirían a la persistencia. Objetivo: Estudiar la estructura poblacional intrapaciente de HCV en niños y analizar la compartimentación en CMSP. Se analizaron muestras seriadas concomitantes de plasma y CMSP de 5 pacientes pediátricos durante 38-115 meses. Se extrajo ARN total y se amplificó por RT-PCR anidada un fragmento de 351pb que incluye la región hipervariable 1 (HVR1). Los amplicones fueron clonados y se secuenciaron 10 clones por muestra. Se reconstruyeron las relaciones filogenéticas entre las secuencias nucleotídicas usando el programa Network 4.6  y se determinó la estructura poblacional agrupando dichas secuencias en comunidades virales (CVs) mediante el software BAPS 5.4. La compartimentación se analizó con el software BaTS. En los casos 1, 2 y 3 se observó un patrón evolutivo dinámico en plasma, con una marcada variación en la composición de la cuasiespecie de un tiempo a otro. El número de CVs hallado varió entre 4 y 7, y a lo largo del seguimiento se observaron eventos de diversificación alternados con períodos de homogeneización en los cuales predominó una única CV. Por otro lado, en los casos 5 y 6 se evidenció un patrón más estable, con una única CV que persistió durante años y luego fue paulatinamente reemplazada por una nueva. Respecto a la compartimentación, en todos los casos se observaron grupos homogéneos de clones de CMSP dispersos en la red filogenética. El análisis estadístico de BaTS reveló que en todos los casos existe compartimentación, ya que la distribución de los clones en la filogenia es significativamente distinta a la distribución esperada por azar según los índices de Asociación, Parsimonia y Clado Monofilético (p<0.001). Más aún, las CVs en CMSP no siempre coincidieron con las observadas en plasma. En los pacientes tratados con IFN-a (casos 3, 4 y 5) se encontraron grupos de clones de CMSP en CVs distintas respecto a los clones de plasma concomitantes. La división de la cuasiespecie en CVs es una nueva forma de presentar la evolución intrapaciente. Se describieron distintos patrones de evolución, lo que sugiere una presión de selección diferencial por parte del sistema inmune del huésped o bien una diferente capacidad de adaptación por parte del virus. El alto grado de homogeneidad observado en los grupos de CMSP muestra que el linfotropismo está restringido a ciertas variantes virales. La variación temporal en la composición de las CVs descriptas señala la importancia de la compartimentación en la persistencia, y apoya el rol de las CMSP como reservorio de variabilidad genética.