Compartimentación del virus de hepatitis C: evolución de la región hipervariable 1 en plasma y células mononucleares de sangre periférica

GISMONDI MI; BECKER PD; GUZMÁN CA; CAMPOS RH; PRECIADO MV

Vaquerías, Córdoba

Encuentro; XXVI Reunión Científica Anual de la Sociedad Argentina de Virología; 2006

Sociedad Argentina de Virología

El virus de hepatitis C (HCV) produce infecciones persistentes que pueden devenir en cirrosis y/o hepatocarcinoma. El sitio de replicación primario de HCV es el hígado, que produce alrededor de 1012 nuevos viriones por día. Las células mononucleares de sangre periférica (PBMC) constituyen un reservorio extrahepático del HCV, que contribuye a la persistencia viral. La replicación de HCV en PBMC ocurre en un nivel muy bajo. En un mismo hospedador, el virus se presenta como un conjunto de variantes genéticas diferentes, que evolucionan en conjunto frente a las presiones selectivas que les ofrece el entorno. La región hipervariable 1 (HVR1) de HCV es la región más variable del genoma viral y resulta de elección para el estudio de la evolución del virus intrapaciente. El objetivo de este trabajo fue describir y analizar la evolución de HVR1 en plasma (P) y PBMC (C) durante la infección crónica por HCV. Se seleccionó un paciente HCV+ (genotipo 1a/c) de 12 años de edad al inicio del estudio, sin antecedentes de riesgo asociados a la infección y sin otra patología de base. El paciente estudiado recibió tratamiento con interferón a durante 8 meses y resultó no respondedor al mismo. Se obtuvieron muestras de sangre entera a los tiempos: 0, 21, 24, 29, 55 y 63 meses (muestras a 21 y 24 meses: intra-tratamiento). Se separó el plasma y se aislaron los PBMC por centrifugación sobre Histopaque (SIGMA). Se extrajo el ARN total de P y C y se amplificó por RT-PCR anidada un fragmento de 351 pb que contiene a la región HVR1. Se determinó la secuencia directa de los amplicones. Los productos de amplificación se clonaron y se secuenciaron al menos 5 clones por muestra. Las secuencias se analizaron con los programas BioEdit, Modeltest, PAUP* y MEGA. Las muestras de P analizadas por secuenciación directa (0, 21, 24, 29 y 55 meses) presentaron múltiples sitios indeterminados antes, durante y después del tratamiento. Se detectó la presencia de distintas variantes de HVR1 en cada una de las muestras de P clonadas (21, 24 y 29 meses). La diversidad intramuestra se mantuvo a lo largo del tiempo, tanto en nucleótidos como en aminoácidos. Las muestras de C clonadas (21 y 29 meses) presentaron conservación total de la secuencia de aminoácidos de HVR1 intramuestra, mientras que a distintos tiempos estas secuencias fueron diferentes (evolución intermuestra). El análisis de las relaciones filogenéticas entre las variantes de P y C reveló que, para un mismo tiempo, la variante de HVR1 detectada en C nunca se observa en la muestra de P. En las muestras analizadas, las variantes virales detectadas en C se observan en P en tiempos posteriores, a excepción de un caso, en que la variante de C también se observó en una muestra de P anterior. La proporción de las variantes de C detectadas también en P a otro tiempo fue siempre minoriaria. Este trabajo demuestra la existencia de dos compartimentos (P y C) extrahepáticos en el paciente estudiado, que presentan distintos patrones de evolución de HVR1. La mayor variabilidad de esta región en P estaría relacionada con las múltiples presiones de selección presentes en plasma (en este paciente, respuesta inmune y tratamiento antiviral). La detección de una única variante de HVR1 en C podría relacionarse con una restricción para la infección o para la replicación del HCV en dichas células. La población mono u oligoclonal de HCV presente en C contribuye a la viremia plasmática en una baja proporción.