Condiciones de bombardeo de partículas con gfp para una eficaz transformación genética de cebada

GÓMEZ IBARRA, A.R.; SOUZA CANADA, E,D;; GUILLERMO R. PRATTA; BUSI, M,V, ; PERMINGEAT, H,

Corrientes

Congreso; 50° Congreso Argentino de Genética; 2022

Sociedad Argentina de Genética

La transgénesis es una herramienta clave en el mejoramiento genético de los cultivos que depende de un conjunto de variables para su éxito. En la biolística, estos se pueden agrupar como parámetros biológicos y físicos, asociados al explanto, al medio del cultivo in vitro, al tipo, tamaño y densidad de las partículas de bombardeo, junto con la fuerza propulsora y la distancia al objetivo que determinan la intensidad del impacto de la partícula. Con el objetivo de mejorar la efectividad de esta técnica, se analizó la expresión transiente de la proteína verde fluorescente sobre callos embriogénicos escutelares maduros e inmaduros del genotipo Golden Promise. Se bombardearon 3 placas conteniendo 20 embriones cada una a distintas alturas (3, 6 y 9 cm) y presiones de bombardeo (900 y 1200 psi) con partículas de tungsteno (1,1 µm) recubiertas de un plásmido con el marcador de GFP, sujetos a tratamiento osmótico pre- (4-5 h) y post-bombardeo (16 h). En los explantos se constató la expresión génica en forma de puntos fluorescentes de GFP mediante microscopía de epifluorescencia, Los embriones inmaduros bombardeados a 900 psi y 6 cm de distancia mostraron el mayor número de puntos fluorescentes en sus células (60%). El análisis X2 no detecto diferencias significativas entre presiones, pero si para embriones y distancias, en el caso de los embriones maduros se evidenciaron considerables valores nulos de expresión en ambas presiones a 9 cm. Se concluye que estos resultados constituyen un avance importante en la construcción de un protocolo de transformación de cebada.