Producción y purificación de pectinesterasa de Fusarium oxysporum

V. RAJAL; R. SALOMÓN; C. CUEVAS; G. ELLENRIEDER

Córdoba, Argentina

Congreso; XX Congreso Argentino de Química; 1994

La enzima pectinesterasa (PE) fue producida a partir de cultivos de Fusarium oxysporum FRI 0160.3 en un fermentador de laboratorio, usando pectina  cítrica como fuente de carbono. La máxima actividad fue 1.1 UI/mL (1.76 UI/mg proteina) a las 90 horas de cultivo. Purificando el filtrado del cultivo mediante cromatografía de intercambio iónico y filtración por gel se obtuvo una fracción de enzima con una actividad de 103 UI/mg de proteina. En geles nativos se observó sólo una banda  en la electroforesis de la PE purificada,  pero en presencia del desnaturalizante dodecilsulfato de Na (SDS) apareció una segunda banda, aunque muy tenue. El peso molecular de la PE purificada fue 28 kD determinado por filtración por gel, y 28.8 kD por electroforesis en condiciones desnaturalizantes. La máxima actividad enzimática se encontró a 55°C y pH 7. La estabilidad térmica presentó un máximo a pH 4 y otro a 7, y se observó que es mayor en soluciones más concentradas de la enzima. La constante de Michaelis-Menten fue 5.2+0.4 g/L y el número de recambio 66+3 L/s. Se concluye que la cepa empleada constituye una buena fuente de PE, fácil de purificar y con características de actividad y estabilidad encontradas en otros hongos microscópicos.