Validación de sistemas de marcadores genéticos para identificar contaminación fecal en aguas

HÉCTOR A. CRISTÓBAL; HUGO R. POMA; VERÓNICA B. RAJAL

San Juan

Congreso; XXIV Congreso Nacional del Agua - CONAGUA 2013; 2013

El agua es el principal vehículo de exposición humana a los peligros microbiológicos por ingesta directa, actividades recreativas, irrigación o en la conformación de aerosoles. El presente trabajo es el primer paso en Argentina hacia la identificación de la fuente de contaminación microbiana (Microbial Source Tracking) en aguas. El método se basa en la detección de marcadores moleculares en el ADN ribosomal 16S de los Bacteroides que son indicativos de su huésped. Los Bacteroides son los principales microorganismos, componentes naturales de la flora intestinal de animales de sangre caliente, es decir son los constituyentes de las heces humana y animal. Antes de realizar la identificación de estos microorganismos en aguas, es necesario validar la metodología existente para nuestra región geográfica. Para ello se colectaron muestras fecales a partir de diferentes poblaciones (humanas, caninas, felinas, equinos y rumiantes), las que fueron procesadas para la extracción de ácidos nucleicos, empleados en la validación mediante PCR en tiempo real. Se utilizaron los sistemas BacHum y AllBac (sistemas de cebadores y sondas TaqMan publicados en la literatura) para la identificación de Bacteroides humanos y universales, respectivamente. A partir de un total de 22 muestras fecales humanas, 17 fueron verdaderos positivos para los dos sistemas evaluados. Ambos sistemas fueron evaluados con 7 miembros de cada población de animales, obteniéndose amplificaciones positivas para todas las muestras con el sistema AllBac. Con el sistema BacHum se observaron sólo dos reacciones cruzadas con muestras de animales (falsos positivos). Los resultados obtenidos permiten decir que el sistema BacHum identifica Bacteroides humanos con una especificidad del 93%, como así también permite diferenciarlos de los Bacteroides de origen animal con una sensibilidad del 77%. En conclusión, el sistema BacHum permite identificar si el origen de la contaminación fecal es humano. Se espera que estos sistemas validados se puedan aplicar exitosamente en fuentes de agua: río, laguna, dique, residuales y subterráneas.