Búsqueda de nuevos fotosensibilizantes y principios activos a partir de plantas regionales para su uso en el tratamiento del cáncer

MAMONE L, DI VENOSA G, CASAS A

Editorial académica española

Lugar: Berlín; Año: 2013 p. 45

978-3-8465-7926-8

La luz puede ser empleada para el tratamiento de tumores superficiales o de acceso por vía endoscópica por medio de la Terapia Fotodinámica (TFD), combinación de fotosensibilizantes con luz visible. Algunos compuestos encontrados en las plantas han sido usados como fotosensibilizantes en la TFD. El objetivo de este trabajo es investigar una colección de extractos de plantas autóctonas para buscar nuevos fotosensibilizantes de uso en el tratamiento del cáncer, y paralelamente evaluar las propiedades curativas per se de estos extractos. Se estudió una colección de 28 extractos realizados a partir de especies vegetales autóctonas de Argentina. El screening inicial se realizó en la línea celular de adenocarcinoma mamario murino LM2. La mayoría de los extractos no presentaron actividad citotóxica a concentraciones menores a 0,5 mg/ml. Sin embargo, se encontraron extractos con actividad citotóxica per se; los extractos metanólicos de las flores de Iochroma australe, Solanum verbascifoilum y Jacarandá mimosifolia, el extracto acuoso de Efedra tuediana hoja, el extracto metanólico de Combretum fruticosum hoja y los extractos metanólico y acuoso de la hoja de Solanum verbascifolium. Los extractos de Iochroma australe flor y los de Solanum verbascifolium hoja, fueron testeados además en la línea epitelial normal de mama humana HB4a y en su derivada transfectada con el oncogen Ras (HB4a-Ras) con el fin de evaluar la selectividad. No se observó selectividad por la línea tumoral en la acción citotóxica ejercida por los extractos, si bien se observó una leve pero no significativa mayor sensibilidad a ambos extractos en la línea tumoral. Tampoco se observaron diferencias significativas entre la respuesta de la línea mamaria murina LM2 y las humanas HB4a y HB4a-Ras. Las concentraciones de los extractos que se utilizaron en los ensayos de citotoxicidad son comparables a las empleadas de otros extractos vegetales crudos en otros trabajos de screening de citotoxicidad de extractos vegetales autóctonos (Anesini et al, 2001; Ruffa & Ferraro, 2002). Existen varios agentes antineoplásicos derivados de compuestos vegetales, entre ellos el Taxol, los alcaloides de la Vinca y las campotecinas. Debido a que Solanum verbascifolium e Iochroma australe podrían contener alcaloides, por pertenecer ambas especies a la familia de las Solanáceas, es probable que la actividad citotóxica se deba a dichos compuestos. Por otra parte, se analizaron las propiedades fotoactivas de los extractos, con el fin de hallar nuevos compuestos fotosensibilizantes para ser usados en Terapia Fotodinámica. El screening de los extractos se realizó en primer lugar en la línea celular LM2 y se hallaron  los extractos con alta actividad fototóxica: los extractos metanólicos de las hojas de Combretum fruticosum y Scutia buxifolia. Seguidamente, se evaluó la selectividad de dichos extractos como fotosensibilizantes, comparando su actividad fototóxica en las líneas HB4a, HB4a-Ras y la línea de queratinocitos PAM212. Al utilizar ambos extractos, se observó selectividad en su acción, siendo las líneas tumorales (LM2 y HB4a-Ras) más sensibles a la TFD que las líneas normales (PAM212 y HB4a). Es decir, cuando se utilizaron los extractos como fotosensibilizantes, fue necesario menos tiempo de exposición a la luz para inducir la muerte celular en las líneas tumorales que en las normales. A su vez, es importante destacar que las líneas de epitelios glandulares (LM2, HB4a y HB4a-Ras), tanto normales como tumorales, resultaron más sensibles a la TFD que la línea de queratinocitos PAM212. Cabe señalar que se realizaron análisis para descartar a la clorofila como el principio fotoactivo presente en los extractos metanólicos de Scutia buxifolia hoja y Combretum fruticosum hoja. Para ello, se realizaron ensayos de determinación de fototoxicidad utilizando como potencial fotosensiblizante a la clorofila a. Los resultados indicaron que a las concentraciones máximas no citotóxicas, la clorofila no es capaz de dar cuenta del efecto fototóxico observado en los extractos. Por otra parte, se está llevando a cabo por el equipo del Dr Ian Eggleston, en el laboratorio de Química Medicinal del Departamento de Farmacología y Farmacia de la Universidad de Bath, el aislamiento de los principios activos de los extractos mencionados. En principio, estos trabajos descartaron la presencia de clorofila b en los extractos por comparación con una muestra de referencia mediante HPLC, con detección fluorométrica y UV. Por lo tanto, podríamos concluir que no existe clorofila b en los extractos de S. Buxifolia y C. fruticosum, y si bien poseen seguramente una cierta cantidad de clorofila a, su concentración en los extractos no sería la responsable de la fototoxicidad observada. El único fotosensibilizante natural que se usa actualmente en estudios clínicos es la Hipericina y ésta fue hallada a partir de la observación de fotosensibilización en ganado (Agostinis et al, 2002). Asimismo, Nuñez Montoya et al (2008) encontraron que las antraquinonas presentes en la especie de la familia Rubiacea Heterophyllaea pustulata, también causan fotosensibilización en ganado, y presentan acción fototóxica in vivo, sin embargo, aún no se han publicado estudios in vitro que nos permitan comparar dosis lumínicas letales en esta especie, con las de nuestros extractos. Sin embargo, los valores de DL50 determinados, son menores que los empleados para otras sustancias fotosensibilizantes de uso común en TFD en las mismas líneas celulares utilizadas en este trabajo (Casas et al, 2001; Rodriguez et al, 2007), lo cual indicaría que se trata de principios altamente fotoactivos y promisorios. Nuestros estudios, realizados in vitro, constituirían una primera etapa en el análisis de la potencial función fototóxica (y/o antitumoral) de los extractos de especies vegetales autóctonas argentinas estudiados. Para determinar la factibilidad de su empleo como agentes antitumorales per se o fotosensibilizantes, son necesarios estudios in vivo, así como la identificación y caracterización química, de sus principios activos.