Mecanismos de resistencia a la Terapia Fotodinámica en células transfectadas con el oncogén ras

RODRIGUEZ L, DI VENOSA G, MAMONE L, GÁNDARA L, SCHICKINGER S, BATLLE A, CASAS A.

Buenos Aires

Jornada; XXVI Jornadas de Oncología Instituto AH Roffo; 2010

Instituto AH Roffo

La Terapia Fotodinámica (TFD) es un tratamiento antineoplásico basado en la acumulación preferencial de un fotosensibilizante en el tejido maligno luego de su administración. La iluminación con una luz de longitud de onda adecuada, da lugar a reacciones fotoquímicas que producen la destrucción selectiva del tejido tumoral. El objetivo de este trabajo es explicar los mecanismos que inducen la mayor resistencia a la TFD observada en trabajos previos en la línea celular tumoral HB4a-Ras de epitelio luminar mamario transfectada con el oncogen H-Ras respecto a la línea parental de epitelio mamario normal HB4a. Este modelo ya se ha empleado como representativo de una línea celular tumoral y una normal. Se analizó mediante microscopía confocal espectral de fluorescencia, la localización subcelular de un panel de fotosensibilizantes: Verteporfirina, bis(dimetil-1-amino)naranja de acridina, Foscan, Photofrin II, Clorina e6 y Merocianina 540) y no se observaron diferencias entre ambas líneas celulares. También se analizó la expresión de moléculas de adhesión así como de aquéllas relacionadas con los procesos de resistencia múltiple a drogas para establecer la posible asociación con la resistencia a la TFD. En ensayos de inmunofluorescencia con las moléculas relacionadas con los mecanismos de supervivencia tales como la proteína de resistencia múltiple a drogas MDR-1 y survivina, tampoco se observaron diferencias entre ambos tipos celulares. Dichos resultados fueron confirmados en ensayos de Western Blot. Moléculas de adhesión al sustrato tales como vinculina y moléculas involucradas en la adhesión célula-célula tales como E-cadherina presentaron igual expresión en las células transfectadas con el oncogén H-Ras comparadas con las parentales, pero su distribución intracelular fue diferente. Por otro lado se desarrollaron ensayos de adhesión celular sobre proteínas de matriz extracelular tales como Fibronectina, Colágeno I y IV y Laminina, empleando seroalbúmina bovina como control de pegado inespecífico. El grado de adhesión se documentó mediante la tinción con cristal violeta de las células adheridas, y posterior cuantificación colorimétrica. Pudo observarse que en todo el rango de concentraciones empleadas de las distintas moléculas de matriz extracelular, las células HB4a-Ras presentaron mayor adhesión que las HB4a, inclusive esta diferencia se encontró en el pegado inespecífico a seroalbúmina bovina. De estos resultados se puede concluir, que las células tumorales HB4a-Ras poseen mayor adhesión al sustrato, comparadas con las normales HB4a, por lo que es posible decir que el mecanismo de resistencia a la TFD podría estar mediado por mecanismos de adhesión. Además, se descarta que la mayor resistencia al tratamiento fotodinámico en las células transfectadas con Ras se deba a diferencias en la localización subcelular de los fotosensibilizantes o a la expresión diferencial de proteínas asociadas con resistencia a antineoplásicos.