Comparación de dos métodos de extracción de péptidos bioactivos a partir de pieles de Hypsiboas pulchellus (Anura: Hylidae) 7

SIANO, A.; GATTI, P; BIANCHI, M; RUSSELL-WHITE, K; SIMONETTA, A; LAJMANOVICH, R; TONARELLI, G.

UNL Santa Fe

Jornada; 73º REUNIÓN DE COMUNICACIONES CIENTÍFICAS DE LA ASOCIACIÓN DE CIENCIAS NATURALES DEL LITORAL.; 2008

ACNL

Los péptidos antimicrobianos (PAMs) desempeñan un rol importante en la inmunidad innata de los organismos procariotas y eucariotas, constituyendo una de las primeras líneas de defensa contra la invasión de microorganismos patógenos. Las glándulas de la piel de los anfibios han demostrado ser una fuente de PAMs, habiéndose descrito aproximadamente 500 péptidos obtenidos de esta fuente. El objetivo de este trabajo fue comparar dos métodos de extracción: en un caso se emplearon las pieles obtenidas a partir de los animales eutanizados, y en el otro se realizó la extracción directa de las secreciones, a partir de los animales vivos, con posterior liberación de los mismos en su hábitat natural. El estudio se efectuó sobre especimenes adultos de Hypsiboas pulchellus recolectadas en Paraná (Entre Ríos, Argentina). En el Método 1 se realizó una extracción de las pieles trituradas con etanol: agua (80:20) (v/v) conteniendo 2 % de ácido acético, seguida de posterior centrifugación y liofilización; en el Método 2 se procedió a la estimulación eléctrica de las glándulas cutáneas(*). Los extractos completos y los obtenidos por diálisis (membranas de cut off 1kDa y 2kDa) fueron analizados por RP-HPLC C18 en idénticas condiciones, a fin de comparar los respectivos perfiles cromatográficos (detección a 220nm). Además, se evaluó la actividad antimicrobiana de las mismas muestras por el método de difusión en agar, empleando bacterias Gram (+) y Gram (-). Se pudo determinar que, si bien ambos métodos son adecuados para la extracción de los compuestos activos, empleando la estimulación eléctrica se obtuvieron mayores porcentajes de los mismos, por lo que este método no destructivo resulta óptimo para el procesamiento y contribuye a la conservación de las especies en estudio.