Desarrollo de método de cromatografía de alta performance para la determinación de Ácido Retinoico en plasma de anfibios y reptiles

TEGLIA C.M; NARETTO, S; ATTADEMO A.M.,; CHIARAVIGLIO, M.; PELTZER, P.M.; LAJMANOVICH, R.C

Mendoza

Congreso; 7º CONGRESO ARGENTINO DE QUÍMICA ANALÍTICA; 2013

El Ácido Retinoico (RA) y sus isómeros son derivados de la vitamina A y juegan un papel importante envarios procesos biológicos esenciales, incluyendo la visión, la reproducción, el desarrollo embrionario de losvertebrados, el crecimiento, la diferenciación, el desarrollo de los huesos, y el mantenimiento de la saludgeneral del organismo [1]. El objetivo del presente trabajo fue el desarrollo de un método cromatográficopara la caracterización de los niveles plasmáticos básales de RA en anfibios y reptiles, teniendo como guíael trabajo descripto por Béruvé V. E. y colaboradores [2].Las muestras fueron tomadas por punción cardíacaen anfibios (Leptodactylus chaquensis N = 28 y L. latrans N = 7) y caudal en reptiles (Tupinambis merianaeN = 12 y T. rufescens N = 5). Los analitos se extrajeron del plasma mediante extracción líquido-líquido.Paraoptimizar las condiciones cromatográficas se realizó un diseño experimental, eligiendo la metodología deSuperficie de Respuesta para tal fin. La optimización se realizó utilizando una columna ZORBAX EclipseXDB-C18 de 4.6 x 75 mm con partículas de 3.5 μm de diámetro. Las condiciones óptimas dieron comoresultado una fase móvil compuesta por solución ácida (ácido acético al 2 %, más tetrahidrofurano al 5%):Metanol:Acetonitrilo (16:83.4:0.6), flujo 0.68 mL min-1 a 37.1ºC y detección a 350 nm.La curva de calibradoobtenida en plasma por triplicado para 8 niveles de concentración fue lineal en el rango analizado (0.05 ?2.42 μg/mL). En los ensayos de precisión se obtuvieron valores de: nivel 1: 10.2 %; 3: 4.4 %; 6: 7.0 % y 7:6.1 % para el día 1 y de nivel 1: 9.6 %; 3: 4.9 %; 6: 7.0 % y 7: 3.1 % para el día 2. En el ensayo de exactitudse obtuvieron recuperaciones del: nivel 1: 111.6 %; 3: 108.7 %; 6: 93.1 % y 7: 94.6 %. En todos los casos seobtuvieron CV<15% y recuperaciones dentro del ± 15%, cumpliendo los criterios establecidos por EMEA [3].