Caracterización estructural de la glicosilación de SLP en Lactobacillus kefiri JCM5818

G.CAVALLERO ; M. MALAMUD; A. CASABUONO; M. Á. SERRADELL; A. COUTO

Potrero de Funes

Simposio; XXI Simposio Nacional de Quimica Organica; 2017

Sociedad Argentina de Quimica organica

La capa S (S-layer), es la envoltura celular más externa que se encuentra presente en bacterias y Archaeas, constituida por proteínas. Éstas, pueden presentar modificaciones postraduccionales, siendo la glicosilación, la más reportada. A pesar de que se ha identificado la presencia de proteínas de capa S en gran variedad de especies en Lactobacillus, solo algunas se encuentran glicosiladas, y solo en una de ellas, en L. buchneri se encuentra reportada la caracterización estructural de la glicosilación (1). Es por ello, que el objetivo de este trabajo es caracterizar estructuralmente la glicosilación de la proteína de capa S de L. kefiri JCM 5818, complementando los resultados recientemente reportados para L. kefiri CIDCA 83111 (2). La caracterización de la glicosilación de la proteína de capa S se dividió en dos niveles: caracterización del glicano que compone la glicoproteína y determinación del sitio de glicosilación. Para el primer objetivo, un lisado proteico de la bacteria fue analizado por SDS-PAGE y la banda correspondiente a la proteína capa S fue cortada y sometida a una -eliminación reductiva (0.05M NaOH, 1M NaBH4, 50°C, 16h). Los oligosacáridos reducidos liberados se analizaron por HPAEC-PAD identificándose compuestos de hasta 8 unidades de glucosa. Una fracción de los oligosacáridos liberados, fue hidrolizada y los azúcares componentes fueron analizados por HPAEC-PAD determinándose glucosa como componente neutro mayoritario. Por otra parte, con el fin de determinar el sitio de O-glicosilación, la banda correspondiente a la proteína capa S proveniente de SDS-PAGE fue sometida a una digestión enzimática con tripsina seguida de Glu-C. Por medio de la técnica Cotton HILIC, una fracción fue enriquecida en glicopéptidos y fue analizada por nanoHPLC-ESI-Orbitrap. Los espectros obtenidos mostraron la presencia de un péptido conteniendo el motivo SASASSASSASSA sustituído por hasta 36 unidades de hexosas y se identificó además, N-glicosilación en el péptido 328-363, con glicanos de tipo complejos sialilados.La glicosilación caracterizada difiere significativamente de la descripta para L. buchneri, y refleja que incluso en microorganismos estrechamente relacionados filogenéticamente y en proteínas con alta homología, la glicosilación puede ser muy específica.