Análisis por UV-MALDI-TOF MS del lipopolisacárido de Xanthomonas Axonopodis pv citri

A.C. CASABUONO; S. PETROCELLI; J. OTTADO; E. G.ORELLANO; A. S. COUTO

Mendoza- Argentina

Congreso; XVII Simposio Nacional de química Orgánica; 2009

Soc. Argentina de Investigación en Química Orgánica

ANÁLISIS POR UV-MALDI-TOF MS DEL LIPOPOLISACÁRIDO DE XANTHOMONAS AXONOPODIS PV CITRI Adriana C. Casabuono1, Silvana Petrocelli2; Jorgelina Ottado2, Elena G.Orellano2 y Alicia S. Couto11, Silvana Petrocelli2; Jorgelina Ottado2, Elena G.Orellano2 y Alicia S. Couto11 1CIHIDECAR-Dpto.Q.Orgánica,FCEyN-UBA;Buenos Aires, CP1428, Argentina; adrcas@qo.fcen.uba.arCIHIDECAR-Dpto.Q.Orgánica,FCEyN-UBA;Buenos Aires, CP1428, Argentina; adrcas@qo.fcen.uba.ar 2IBR-CONICET-UNR, Rosario, CP2000, ArgentinaIBR-CONICET-UNR, Rosario, CP2000, Argentina Los lipopolisacáridos (LPS) son componentes de la membrana externa de bacterias Gram-negativas constituídos por un heteropolisacárido hidrofílico, que generalmente comprende un ¨antígeno-O¨ unido a una estructura más conservada o ¨core¨ (ambos oligosacáridos) a su vez enlazada a un resto lipofílico llamado ¨Lípido A¨, el cual sirve de anclaje de estas macromoléculas a la membrana. La cancrosis de los cítricos es una enfermedad vegetal producida por la bacteria Gram-negativa Xanthomonas axonopodis pv citri. Esta bacteria expresa el LPS en su superficie el cual se comporta como un patrón molecular asociado a patógenos (PAMPs) siendo reconocido por receptores transmembrana de la planta y disparando la defensa basal en la misma. Para entender el tipo de interacción por parte de los PAMPs y los receptores en planta se construyó una mutante en el gen wzt, el cual transloca el antígeno-O del citoplasma al periplasma. En este contexto se analizó la estructura del LPS wt y del LPS wzt.Xanthomonas axonopodis pv citri. Esta bacteria expresa el LPS en su superficie el cual se comporta como un patrón molecular asociado a patógenos (PAMPs) siendo reconocido por receptores transmembrana de la planta y disparando la defensa basal en la misma. Para entender el tipo de interacción por parte de los PAMPs y los receptores en planta se construyó una mutante en el gen wzt, el cual transloca el antígeno-O del citoplasma al periplasma. En este contexto se analizó la estructura del LPS wt y del LPS wzt.. Utilizando espectrometría de masas UV-MALDI-TOF MS se realizó el estudio de los LPS. Los Lípidos A y oligosacáridos liberados por hidrólisis ácida de cada una de las cepas se analizaron en modo positivo y negativo, probando diversas matrices. Se confirmó la semejanza estructural del Lípido A de ambas cepas ya que los espectros fueron coincidentes; en modo positivo presentaron principalmente dos clusters de iones a m/z 1603,9- 1534,5 y 1434,5- 1376,7 correspondientes a diglucosaminas sustituídas con un fosfato de etanolamina y un pirofosfato de etanolamina pentaciladas y tetraciladas respectivamente. En modo negativo mostraron además señales a m/z 1684,3- 1588,16 por presencia de dos unidades de pirofosfato de etanolamina en especies penta-acilados. A su vez cada cluster consistió en varias señales con diferencias de masas de Δm/z= 14 o 16 indicando diferente longitud en los residuos de ácidos grasos saturados y/o 3-hidroxilados. El espectro obtenido del LPS de la cepa wt en modo positivo mostró básicamente cuatro familias de iones debido al compuesto intacto y a fragmentos provenientes de rupturas preferenciales en la fuente (in source fragmentation). La familia de iones en la zona m/z 1330-1600 se relacionan con el Lípido A, en la region m/z 2616- 2800 se corresponden con el ¨core¨, en la zona m/z 3890-3940 se atribuyeron a especies que contendrían principalmente el Lípido A unido al ¨core¨ y en la región de masas altas a m/z 4810-4860 que difieren del grupo anterior en unidades adicionales de desoxihexosas atribuibles al antígeno-O. El oligosacárido de la cepa wt y de la mutante wzt brindaron espectros de masas en modo positivo similares. Se observaron entre otras, señales de ruptura preferencial a m/z 2792,88 y a m/z 2616,90, por posterior pérdida de una unidad de ácido galacturónico, correspondiente al core. El espectro del LPS de la mutante presentó un perfil similar de señales. Así, se confirmó que la mutante wzt tiene un LPS que carece de antígeno-O. Este trabajo constituye el primer estudio estructural por espectrometría de masas del LPS de Xanthomona axonopodi pv citri.Δm/z= 14 o 16 indicando diferente longitud en los residuos de ácidos grasos saturados y/o 3-hidroxilados. El espectro obtenido del LPS de la cepa wt en modo positivo mostró básicamente cuatro familias de iones debido al compuesto intacto y a fragmentos provenientes de rupturas preferenciales en la fuente (in source fragmentation). La familia de iones en la zona m/z 1330-1600 se relacionan con el Lípido A, en la region m/z 2616- 2800 se corresponden con el ¨core¨, en la zona m/z 3890-3940 se atribuyeron a especies que contendrían principalmente el Lípido A unido al ¨core¨ y en la región de masas altas a m/z 4810-4860 que difieren del grupo anterior en unidades adicionales de desoxihexosas atribuibles al antígeno-O. El oligosacárido de la cepa wt y de la mutante wzt brindaron espectros de masas en modo positivo similares. Se observaron entre otras, señales de ruptura preferencial a m/z 2792,88 y a m/z 2616,90, por posterior pérdida de una unidad de ácido galacturónico, correspondiente al core. El espectro del LPS de la mutante presentó un perfil similar de señales. Así, se confirmó que la mutante wzt tiene un LPS que carece de antígeno-O. Este trabajo constituye el primer estudio estructural por espectrometría de masas del LPS de Xanthomona axonopodi pv citri.Xanthomona axonopodi pv citri.